肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，具有发病率高、复发率高、预后差的特点，经肝动脉化疗栓塞（transarterial chemoembolization，TACE）是目前公认的肝癌非手术治疗的首选方法。目前临床上常用的栓塞材料各有优缺点，在临床应用中如何对症使用尚无统一标准，而且TACE治疗能否提高肝癌病人的生存率，仍然存在争议，TACE治疗存在种种缺陷如栓塞不全、缺乏靶向性、毒副作用大、栓塞剂稳定性与可控性差和伴随血管内皮生长因子升高等。因此，发展新型高效的、具有靶向性、可控性强、无毒的肿瘤血管栓塞剂依然是目前肝癌临床治疗亟待解决的重大问题。　　针对以上问题，我们计划采用一种基于靶向性凝血蛋白的选择性栓塞肿瘤血管的抗肿瘤策略。该方法利用截短的组织因子（truncated tissue factor，tTF，又称前体凝血酶或凝血蛋白）作为凝血效应因子，肿瘤血管标志物结合配体EG3287为载体，其中EG3287为VEGF165与Neuropilin-1（NRP-1，VEGF的共受体）结合的核心区域设计出的短肽，构建的靶向性融合蛋白tTF-EG3287能够通过载体把具有潜在凝血功能的tTF选择性地传递到肿瘤血管，tTF借结合的靶细胞膜平台恢复凝血酶的活力，并诱发肿瘤血管凝血反应、血栓形成和栓塞阻断肿瘤组织的血液供应，从而产生抗肿瘤活性。　　为了验证靶向性凝血蛋白tTF-EG3287在原位肝癌的抗肿瘤活性，我们首先通过大肠杆菌BL21(DE3)大量表达tTF-EG3287，破碎菌体得到融合蛋白，经过尿素变性后过镍柱亲和纯化，然后将纯化后的蛋白透析复性，通过凝血时间测定和FX活化实验在体外初步研究了该融合蛋白的凝血活性。然后利用H22肝癌细胞株构建小鼠移植性原位肝癌模型，使用Cy5.5荧光标记tTF-EG3287的方法尾静脉注射原位肝癌模型小鼠中，观察其在主要脏器和肝癌组织中的分布。最后通过尾静脉小鼠给药，组织切片法观察凝血蛋白对肝癌组织血管的栓塞作用，同时利用免疫组织化学法分析正常组织和肝癌组织中的NRP-1和VEGFR表达情况，评价凝血蛋白tTF-EG3287的抗肿瘤活性。　　本实验成功地利用大肠杆菌BL21(DE3)优化表达融合蛋白tTF-EG3287，表达的包涵体蛋白经过高浓度尿素变性后过镍柱纯化，纯度达到95％，复性浓缩后蛋白浓度达1 mg/ml，凝血时间测定和FX活化实验证实其具有凝血活性。荧光定位实验显示tTF-EG3287能选择性富集于肝癌组织，免疫化学结果显示肝癌组织中均高表达NRP-1和VEGFR蛋白，病理学观察可见tTF-EG3287能够选择性定位于肝癌血管，并选择性诱发血管栓塞，导致肿瘤细胞坏死，并能有效抑制小鼠原位肝癌的生长，抑瘤率可达到68％，而对正常组织没有毒副作用。　　总之，我们通过原核表达系统获得靶向性凝血蛋白tTF-EG3287的高效表达，tTF-EG3287能显著的选择性诱发小鼠移植性原位肝癌血管栓塞，抑制原位肿瘤的生长，为肝癌血管栓塞治疗新策略的应用与发展提供理论基础与新思路。