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窝儿七为小檗科植物中华山荷叶(Diphylleia sinensis.Li)的根及根茎。主要产地位于陕西省眉县、太白县、留坝县等境内。属于陕西秦巴地区特色资源药材—太白“七药”之一。该类植物具有祛风除湿、止痛活血、平喘止咳等药用功效。现代研究表明,窝儿七主要化学成分为鬼臼毒素、脱氢鬼臼毒素、山荷素、异苦鬼臼毒素、4’去甲基鬼臼毒素、山奈酚、槲皮素等;药理研究表明,鬼臼毒素具有抗肿瘤作用,黄酮类成分在心血管系统、内分泌系统和抗肿瘤方面具有明显的作用,从而引起人们的广泛关注。本文从窝儿七化学成分入手,展开系统的分离,并建立窝儿七药材质量评价的方法,为发掘新型抗肿瘤药物及窝儿七质量标准的建立奠定了扎实的基础。 目的:本课题对窝儿七化学成分进行研究,并建立窝儿七药材质量评价的方法。 方法:将窝儿七的干燥根茎粉碎,使用浓度为95%的乙醇回流提取,减压浓缩,再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,得到三个部分的浸膏。本文重点分离对象为乙酸乙酯萃取部位,采用硅胶柱色谱法、重结晶、制备薄层色谱法、凝胶色谱法、Rp-HPLC制备柱色谱法等手段,对其展开系统分离,对于分离得到的单体化合物,通过MS、IR、NMR等波谱学方法鉴定结构。其次,薄层色谱法(氯仿-甲醇-甲酸=10∶1∶0.1)鉴别窝儿七药材,采用HPLC法进行含量测定,色谱柱为COSMOSIL-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃;甲醇-0.4%磷酸溶液梯度洗脱;流速1 mL·min-1;检测波长300 nm。 结果:从其中共分离得到10个单体化合物,分别为:β-谷甾醇(1),鬼臼毒素(2),山荷叶素(3),4'-去甲基鬼臼毒素(4),苦鬼臼毒素(5),鼠李柠檬素(6),山柰酚(7),槲皮素(8),鼠李素(9),闭木花酮(10)。其中包括木脂素类化合物5个,黄酮类化合物4个,植物甾醇类化合物1个。其中,化合物6,9,10为首次从该属植物中分离得到。 薄层色谱法鉴别窝儿七药材,分离度好、斑点清晰;HPLC法进行含量测定,4’-去甲基鬼臼毒素(1)、鬼臼毒素(2)、槲皮素(3)、山柰酚(4)和山荷叶素(5)的线性范围分别为4.5~224.0μg·ml-1(r=0.9992)、20.0~1000.0μg·ml-1(r=0.9994)、1.6~78.0μg·m1-1(r=0.9993)、4.2~210.0μg·ml-1(r=0.9997)和5.1~256.2μg·ml-1(r=0.9994),平均回收率分别为99.80(RSD=1.44%)、99.82%(RSD=1.67%)、99.80%(RSD=1.54%)、99.87%(RSD=2.31%)和99.28%(RSD=2.30%)。 结论:所建立的方法灵敏、准确、重复性好,为窝儿七的质量控制提供参考依据。