多杀性巴氏杆菌（Pasteuralla multocida，P.multocida）是青藏高原牦牛出血性败血症的病原菌，但其毒力因子和致病机制尚不清楚。H蛋白（OmpH）是Pm外膜蛋白中的重要组分，对Pm的致病力和侵袭力至关重要。本研究前期从青海省牦牛源强毒株P0910中克隆并表达了OmpH，发现重组OmpH对小鼠可产生90%的保护力，是一种重要的免疫保护性蛋白，而OmpH蛋白是否参与P.multocida对细胞的粘附，入侵及对宿主的致病过程则有待于进一步研究。本研究根据GenBank（登录号：NC017027）中多杀性巴氏杆菌HN06设计ompH基因上下游引物，对青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌分离株P0910、标准菌株C47-8以及疫苗菌株C45-2的ompH基因上下游基因序列分别进行了PCR扩增、克隆，并连接到pEX18AP质粒上，成功构建了重组质粒pEX18AP-ompH。然后将重组质粒分别电转化入分离株P0910、标准菌株C47-8以及疫苗菌株C45-2中，通过同源重组和负筛选技术成功构建并筛选出这3株多杀性巴氏杆菌ompH基因缺失株，为鉴定P.multocida ompH基因的功能，开展P.multocida粘附，入侵，毒力和免疫等机制研究搭建了技术平台。在此基础上，通过体内、外试验比较亲本株和ompH基因缺失株对Vero细胞的粘附能力和对小鼠的毒力差异。结果表明，P0910分离株对Vero细胞的粘附能力最高，约每细胞粘附有32个细菌左右，标准菌株C47-8和疫苗株C45-2粘附能力相似，约每细胞粘附有20个细菌左右，ompH基因缺失后，突变株对VERO细胞的附着能力显著下降，约每细胞粘附有2个细菌左右；同时，实验证明对小鼠的毒力也明显降低，亲本菌株10个细菌剂量下攻毒对小鼠致死，三株ompH基因缺失菌株在107个细菌剂量下攻毒小鼠依然存活。说明ompH基因有可能是多杀性巴氏杆菌的关键毒力基因之一，在P.multocida侵入宿主并对宿主细胞进行粘附的过程中起着重要作用。为阐释P.multocida的致病机理及研制基因缺失疫苗提供了重要的理论依据，为青藏高原牦牛出血性败血症的防控开辟了新的途径。