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由于工业化和城市化的不断深入以及环境污染的加重等原因，近年来全球范围内变态反应性疾病的发病率和严重程度迅速增加。据统计，目前全球有4亿过敏性鼻炎患者、3亿哮喘患者，其中50%居住在发展中国家并且未得到有效的治疗[1]。世界卫生组织(WHO)已将变态反应性疾病列为全球重点防治的疾病。尽管世界各国投入了大量的人力及财力进行深入研究，变态反应性疾病的治疗仍非常困难[2]。目前变态反应性疾病的确切发病机制尚不清楚，但肥大细胞（mast cell，MC）是变态反应中的主要效应细胞，关于变态反应发病的效应机制较为明确：变应原特异性IgE与变应原结合后交联MC表面的IgE Fc受体(FcεRI)，引起MC脱颗粒、组胺释放等事件，进而导致变态反应症状的出现。因此，靶向抑制MC的功能或清除MC是治疗变态反应性疾病的有效策略。近年来有多种MC相关抑制性免疫调节分子及其机制得到明确，为设计新的靶向抑制策略提供了可能。CD72是新近发现表达于MC的具有抑制功能的分子，其配体为CD100。在人MC，CD72通过与可溶型CD100（sCD100）结合而启动对Scf/kit介导信号的负调控，从而抑制MC增殖、趋化和细胞因子的产生。本研究提出构建HuCD100-Fcε融合蛋白靶向MC治疗变态反应性疾病的新策略。HuCD100-Fcε融合蛋白的Fcε段以高亲和力结合并封闭MC表面IgE受体FcεRI，HuCD100识别MC表面受体CD72，通过与CD72结合而抑制Scf/kit通路的激活，从而影响MC的存活、增殖、趋化和细胞因子的产生。本研究拟将人CD100cDNA编码胞膜外区的基因与人IgE的CH2-CH4基因连接，真核细胞表达HuCD100-Fcε融合蛋白，利用表达FcεRI和CD72的人肥大细胞系LAD2分析HuCD100-Fcε的结合活性以及对LAD2的作用。研究目的：1.获取具有良好生物学活性的HuCD100-Fcε融合蛋白。2.初步明确HuCD100-Fcε融合蛋白对人肥大细胞系LAD2的影响。研究内容与方法：1. HuCD100-Fcε表达载体的构建：PCR扩增人Fcε基因，插入含有人CD100基因的质粒HuCD100/pcDNA3.1，构建真核表达载体pcDNA3.1-HuCD100-Fcε。2. HuCD100-Fcε融合蛋白的瞬时表达及鉴定：瞬时转染CHO细胞，ELISA、Western blot检测融合蛋白的表达。3. HuCD100-Fcε融合蛋白的稳定表达及鉴定：筛选稳定转染CHO细胞系，有限稀释法获得高表达融合蛋白的细胞株。4. HuCD100-Fcε融合蛋白对人肥大细胞系LAD2的作用：体外细胞系实验分析HuCD100-Fcε融合蛋白对肥大细胞系LAD2增殖、脱颗粒的影响。研究结果：1.获得了T-vector-Fcε质粒和pcDNA3.1-HuCD100-Fcε重组质粒，将pcDNA3.1-HuCD100-Fcε重组质粒转染CHO细胞后，ELISA和Western blot鉴定融合蛋白HuCD100-Fcε成功表达。2. pcDNA3.1-HuCD100-Fcε重组质粒稳定转染CHO细胞，获得了稳定表达HuCD100-Fcε融合蛋白的细胞系。3.体外实验证明融合蛋白HuCD100-Fcε能抑制人肥大细胞系LAD2的脱颗粒和增殖。结论：本研究首次提出构建HuCD100-Fcε融合蛋白治疗变态反应性疾病的新策略，获得了具有良好结合活性及生物学功能的HuCD100-Fcε融合蛋白，明确了HuCD100-Fcε融合蛋白对LAD2脱颗粒及增殖的影响，为治疗变态反应性疾病提供新的治疗途径和可能的理论依据，为下一步可能的临床应用奠定了基础。