【摘 要】
：
【目的】通过分析小样本高通量胃癌基因表达谱芯片并且结合扩大样本量的临床组织标本及组织芯片验证的方法,寻找胃癌肿瘤中特异性高表达相关基因;评估候选基因DDX18基因在评估胃癌恶性程度及预后判断的临床价值;并通过体内、外实验研究DDX18基因对于胃癌恶性生物学行为的影响,并探讨其作用机制,为开发胃癌治疗的可能新靶点提供实验、理论依据及新思路。【方法】（1）收集2005年12月至2011年12月间于仁济
【基金项目】
：
DDX18通过调控miRNA-21成熟促进胃癌发展的分子机制研究——国家自然科学基金青年项目（编号81602062）；
论文部分内容阅读
【目的】通过分析小样本高通量胃癌基因表达谱芯片并且结合扩大样本量的临床组织标本及组织芯片验证的方法,寻找胃癌肿瘤中特异性高表达相关基因;评估候选基因DDX18基因在评估胃癌恶性程度及预后判断的临床价值;并通过体内、外实验研究DDX18基因对于胃癌恶性生物学行为的影响,并探讨其作用机制,为开发胃癌治疗的可能新靶点提供实验、理论依据及新思路。【方法】（1）收集2005年12月至2011年12月间于仁济医院胃肠外科进行根治性胃癌切除手术且有完整的临床病理及随访资料的585例胃癌患者的石蜡组织标本,构建组织芯片,结合临床资料对患者临床病例特征及与预后的关系进行分析。并应用胃癌基因表达谱芯片分析5对胃癌及配对癌旁组织中m RNA表达差异,结合TCGA数据库最终锁定在胃癌组织中异常上调的胃癌相关基因以进行后续研究。（2）扩大样本量的胃癌新鲜标本中,通过q RT-PCR的方法检测DDX18基因的m RNA表达水平进一步验证。并且利用之前构建的胃癌组织芯片进行免疫组化染色,检测DDX18基因的蛋白表达情况,分析DDX18临床病理学特征及与预后的关系。（3）构建并利用DDX18基因干扰及过表达模型在体内体外实验研究其对胃癌恶性生物学行为的影响,并通过CO-IP、small RNAseq等方法探究DDX18基因在影响胃癌发生发展中的机制。【结果】（1）综合胃癌基因表达谱芯片与TCGA数据库筛选出可能在胃癌中表达失调的基因,并扩大样本量在胃癌新鲜组织中进行q RT-PCR验证证实DDX18基因在肿瘤组织中表达显著升高（P<0.05）。（2）585例胃癌组织芯片免疫组化染色结果显示:DDX18在65.0%（380/585）的胃癌肿瘤组织中表达升高,与配对癌旁组织存在明显差异（P<0.001）。DDX18表达水平与患者肿瘤位置（P<0.001）、大小（P=0.004）、Borrmann分型（P<0.001）、分化程度（P<0.001）、脉管内癌栓形成（P=0.007）、肿瘤淋巴结转移（P<0.001）以及TMN分期（P<0.001）均密切相关,随着患者肿瘤体积增大、分化程度恶化、脉管内癌栓形成、肿瘤淋巴结转移、分期进展,DDX18的阳性率显著增加。通过多因素Cox回归分析,发现DDX18表达水平与浸润深度、淋巴结转移共为影响胃癌患者长期生存的独立危险因素。（3）体外细胞CCK-8实验显示,干扰DDX18后胃癌细胞AGS的增殖活性明显受限,至5天时已较对照组降低了63.0%（P<0.001）;而外源性DDX18能显著促进胃癌细胞SGC-7901的生长,至第5天时细胞增殖活性已较对照组增加了40.7%（P<0.001）。平板克隆形成实验结果显示,干扰AGS细胞中DDX18表达后,干扰组细胞的克隆形成率为3.87±0.67%,显著低于对照组的9.35±1.80%（P<0.01）。Transwell空穿提示干扰DDX18表达后,AGS细胞的迁移、侵袭能力明显弱于对照组（P<0.01）;细胞凋亡实验显示,饥饿48小时后,过表达组SGC-7901-OE细胞的平均凋亡率为11.89±2.08%,显著低于对照组的42.90±5.45%（P<0.01）;而干扰组AGS-sh-DDX18细胞的平均凋亡率为34.88±3.47%,与对照组的17.84±1.50%相比,凋亡细胞比例明显增加（P<0.01）。裸鼠皮下成瘤实验发现,对照组瘤块自12天起迅速增大,第21天时体积达到1752.99±532.69mm3,瘤块质量为1.57±0.56g;而干扰组瘤块生长曲线则较为平坦,直至第21天时大小仅为638.58±217.60mm3,质量平均为0.56±0.31g,差异具有统计学意义（P=0.0003）。（4）small RNAseq分析显示干扰DDX18后mi RNA-21的表达量明显下降,q RT-PCR实验证实DDX18对于mi RNA-21的成熟有促进作用。（5）co-IP实验发现DDX18确实与mi RNA成熟关键酶DROSHA有直接相互作用,荧光素酶报告基因显示mi RNA-21可以靶向PTEN基因3’UTR区域进而降解PTEN。（6）western blot结果证实DDX18通过与Drosha相互作用促进mi RNA-21成熟,进而引起其靶向的PTEN降解,上调AKT信号通路,影响胃癌发生发展的机制设想。【结论】（1）DDX18基因在胃癌肿瘤组织中异常上调,其m RNA表达水平在肿瘤组织中明显高于配对的癌旁组织（2）DDX18蛋白在胃癌肿瘤中表达量随肿瘤体积增大、分化程度变差、脉管癌栓形成、肿瘤浸润深度、肿瘤淋巴结转移程度、分期进展情况而显著增加,DDX18有望作为胃癌分子标志物在将来用以评估预测患者的生存预后。（3）DDX18可以通过与Drosha相互作用促进mi RNA-21成熟,进而引起其靶向的PTEN降解,上调AKT信号通路,影响胃癌发生发展。以上结论均为将DDX18作为可能的胃癌治疗新靶点提供了实验及理论依据。
其他文献
新辅助化疗是局部晚期乳腺癌（local advanced breast cancer,LABC）的首选治疗方法,同样的治疗方案在不同的乳腺癌亚型中显示出了不同的治疗效果,进一步提高化疗疗效,寻找预测的指标是临床拭待解决的问题。【目的】探索单周紫杉醇、顺铂作为新辅助化疗方案在局部晚期乳腺癌患者中的疗效和安全性。探索化疗引起的外周血免疫细胞变化,寻找能够预测化疗疗效的相关基因改变。【方法】1)入组局部
孔隙热弹性材料具有结构和功能的双重用途,多见于天然多孔材料、人造多孔材料和生物工程材料等,由于其具有相对密度低、比强度高、重量轻、隔热等优点,在工程技术领域具有广泛的应用前景。半个世纪以来,对孔隙热弹性材料理论的研究引起了很多学者的兴趣,目前大部分结果都是在线性假设下得到的,且多仅限于频率域内的研究,但是工程和科学中的固体力学问题,本质上属于非线性范畴,因此,开展孔隙热弹性材料和结构的非线性静动力
胆囊癌细胞耐药,具有干细胞特性的胆囊癌侧群（side population,SP）细胞耐药性更强,是影响化疗疗效的主要原因之一。我们前期研究发现升高胆囊癌细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平能下调耐药相关蛋白、提高细胞对顺铂（CDDP）的敏感性,但ROS水平的升高如何促进耐药相关蛋白下调尚不清楚。研究提示,髓细胞白血病-1（myeloid cell leuke
肺癌是世界范围内发生率和死亡率均位居首位的恶性肿瘤,其中肺腺癌和肺鳞癌是肺癌的两大主要组织病理类型。肺癌的病因及发病机制复杂,至今尚未完全阐明。尽管人肺鳞癌的基因组改变已经被揭示,我们对能够起始鳞癌的分子和信号通路还知之甚少,加之目前能够模拟人类肺鳞癌分子改变的小鼠模型稀缺,严重阻碍了对肺鳞癌发病机制的理解和药物开发。本研究通过建立新的肺鳞癌和肺腺癌遗传修饰小鼠模型,探讨了转化生长因子-β（tra
MLL白血病是一类由11q23染色体易位导致的急性白血病。此类型的白血病预后极差,目前还没有有效的治疗手段。应用蛋白酶体抑制剂的治疗方案是针对这类白血病的首个经临床验证有效的靶向治疗策略。我们课题组在前期工作中发现蛋白酶体抑制剂能特异地杀死表现为pro-B ALL的MLL白血病细胞。已有研究报道,蛋白酶体抑制剂能够杀伤处于B细胞分化末期的浆细胞,而不能杀伤处于分化早期的B细胞。目前蛋白酶体抑制剂特
目的:本研究旨在评估原发性肠道淋巴瘤（primary intestinal lymphoma,PIL）的临床特点、病理类型、治疗方法以及影响预后的相关因素。同时针对PIL病理类型中最常见的原发肠道弥漫大B细胞淋巴瘤（primary intestinal diffuse large B cell lymphoma,PI-DLBCL）,分析国际预后指数（international prognostic
背景:随着结直肠癌发病率和死亡率的逐步上升,其早期诊断也愈发得到重视,现有的诊断技术需要不断的改进。第一部分内镜磁性成像技术对患者结肠镜检查体验的影响目的:评估低经验医师在结肠镜检查中应用内镜磁性成像技术对患者肠镜体验的影响;同时构建简易结肠镜作用检测装置,设计探索性研究,尝试以客观量化的方式观察应用内镜磁性成像技术后内镜对肠道作用情况,从而探讨内镜磁性成像技术改善肠镜体验的机制及其可能的降低并发
【目的】通过大样本前瞻性研究分析PRDM14表达和肺癌发生相关性,明确其临床意义,指导肺癌个体化的治疗。的【方法】收集300例病理分期为T1-T2期的非小细胞肺癌组织标本,结合临床病理资料,通过实时定量PCR和焦磷酸测序方法分别检测PRDM14的表达情况,根据其术后的随访资料分析PRDM14的表达对于非小细胞肺癌预后的临床意义。在细胞水平研究PRDM14基因的功能和其参与调控分子机制。并在制备的非
【研究背景】急性髓性白血病（Acute myeloid leukemia,AML）是以造血干/祖细胞克隆性扩增引起的血液系统恶性肿瘤,好发于中老年人,具有发病急,复发率高,存活率低的特点。白血病起始细胞（Leukemia initiating cells,LICs）是AML复发的主要原因,具有自我更新能力和分化能力,对化疗药物耐受。特异性靶向LICs被认为是治疗AML最有前景的策略。前期研究提示免
第一部分 乙酰辅酶A合成酶2在结直肠癌中的表达及其意义目的 探讨乙酰辅酶A合成酶2（acyl-CoA synthetase short-chain family member 2,ACSS2）在结直肠癌中的表达及其意义。方法 在组织芯片上,采用免疫组织化学方法检测74例结直肠癌组织及40例正常结直肠上皮组织标本中ACSS2的表达,结合结直肠癌病人的临床病理特点进行分析。同时应用RNA干扰技术在肠癌