目的：3,3-二吲哚甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)是十字花科蔬菜中的一种生物活性物质吲哚-3-甲醇(I3C)在胃内酸性环境下的水解产物，具有抗肝癌的效应，但其确切的机制尚不清楚。本研究以SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株为研究对象探索DIM抑制增殖和诱导凋亡的分子机制及信号通路，为DIM的临床应用提供科学依据。
　　方法：1.采用CCK-8法与克隆形成实验检测肝癌细胞增殖水平，Hoechst染色、流式细胞术检测细胞凋亡水平，蛋白免疫印迹法检测PCNA和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、cleaved-PARP、BAX、总p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activatedproteinkinase,p38MAPK)和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达水平。2.以Fluo-3/AM为探针，观察肝癌细胞内胞浆游离钙(cytolicfreecalcium,[Ca2+]i)，检测Ca2+相关蛋白CaMK、calpain、CaSR的表达水平及CaMK的mRNA水平。3.采用钙离子供体(A23187)，内质网钙泵抑制剂(TG、BHQ)增加[Ca2+]i水平，采用胞质钙螯合剂(BAPTA/AM)络合细胞内游离钙离子，PLC-IP3R通路抑制剂(2-APB、U73122)抑制内质网钙库的钙释放来降低[Ca2+]i水平，探索调控钙离子水平在DIM抗肝癌效应中的作用。运用EGTA螯合胞外游离钙，探索钙内流对DIM诱导效应的影响。4.运用钙通道阻滞剂米贝地尔(mibefradil)预处理肝癌细胞0.5h，观察其对DIM的抗肝癌细胞效应的影响。
　　结果：1.与对照组相比，DIM显著降低肝癌细胞的增殖活力，有统计学意义(P＜0.05)。DIM抑制肝癌细胞集落形成(P＜0.05)及PCNA蛋白水平(P＜0.05)。此外，DIM处理组中的细胞核固缩，形状不规则，DIM增加cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax的水平(P＜0.05)。2.DIM增强p-p38MAPK而总p38MAPK水平保持不变，与单独DIM处理相比，p-p38抑制剂预处理细胞能够减弱DIM诱导的细胞生长抑制，恢复PCNA的蛋白水平(P＜0.05)。p-p38抑制剂预处理还逆转由DIM诱导的细胞凋亡(P＜0.05)。3.荧光观察DIM处理组[Ca2+]i升高，CaMK和calpain的表达升高(P＜0.05)，CaSR的水平被抑制(P＜0.05)，CaMK蛋白的mRNA水平并未改变。A23187、TG和BHQ可增加[Ca2+]i水平，亦增强了DIM抗肝癌效应(P＜0.05)。BAPTA/AM、2-APB和U73122降低[Ca2+]i水平，缓解了DIM诱导的凋亡效应(P＜0.05)。BAPTA/AM能够明显减轻DIM的抗肝癌效应，且与p-p38MAPK活化和细胞凋亡减少有关，但对DIM的增殖抑制却未见改变。使用EGTA降低细胞外[Ca2+]i水平，DIM抗肝癌作用都能够被缓解(P＜0.05)。钙离子内流与钙离子从细胞内钙库中释放都与DIM引起细胞内游离钙水平的升高有关。4.与60μMDIM处理组相比，荧光探针显示米贝地尔预处理可升高[Ca2+]i，并增强DIM抗肝癌效应(P＜0.05)。
　　结论：DIM对肝癌细胞具有增殖抑制和凋亡诱导效应，呈现浓度-效应和时间-效应关系，且抗肝癌效应与[Ca2+]i升高及p38MAPK的磷酸化激活有关，特别是Ca2+离子供体可增强DIM的抗肝癌作用，提示DIM与Ca2+离子供体的联合治疗可成为肝细胞癌治疗的新方法。