复制起始识别复合体6（Orc6）是与DNA复制起始有关的蛋白质,是复制起始识别复合体（ORC）中唯一与AAA+ATP酶无关的亚基,对真核生物DNA复制起始发挥着重要作用。目前除DNA复制以外,Orc6还在异染色质形成、纺锤体组装等方面发挥作用,然而到目前为止,其在早期胚胎发育过程中的作用尚不明确。本实验通过RNAi技术研究Orc6基因的在早期胚胎发育过程中的作用,研究发现Orc6基因敲除的纯合胚胎致死。然后通过RNAi技术构建敲低模型,以获得充足的胚胎研究Orc6在小鼠植入前早期胚胎发育过程中的作用。1.Orc6^-/-胚胎表型分析通过取E7.5和E3.5的后代进行表型分析,我们发现E 7.5的胚胎基因型比例失调,但E3.5胚胎的基因型比例符合孟德尔遗传定律,推测Orc6^-/-胚胎的死亡时间在E3.5-E7.5之间,接着对E3.5胚胎进行Outgrowth培养,纯合胚胎没有突破透明带。2.Orc6 mRNA在植入前早期胚胎中的表达利用定量PCR技术对Orc6在卵母细胞以及早期胚胎的表达分析,发现Orc6的表达在胚胎发育的各个时期并无规律可循。从卵母细胞至受精卵阶段Orc6 mRNA的表达量显著增加,2-cell期下降,4-cell和8-cell期表达量增加,桑葚胚期的表达逐渐下降,到囊胚期表达量到达最低。3.Orc6基因沉默对植入前早期胚胎发育的影响胞浆注射Orc6 siRNA建立胚胎敲低模型,通过免疫荧光、定量PCR等技术,了解Orc6对小鼠胚胎发育第一、二次谱系分化的影响,以及Orc6基因缺失对细胞凋亡以及纺锤体组装的影响。实验结果发现Orc6会通过影响PrE细胞命运决定的调节因子Sox17的表达,来影响PrE细胞命运分配。除此以外,Orc6基因沉默会导致胚胎出现无法修复的DNA损伤,但Orc6基因沉默并不影响纺锤体组装。综上,Orc6基因沉默影响PrE细胞的命运分配,且导致不可修复的DNA损伤,但对纺锤体的正确组装没有影响。通过实验,我们对Orc6基因功能有了进一步的了解,为胚胎发育第二谱系分化的研究提供了新的思路。