【摘 要】
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实验目的: 本研究旨在探讨bFGF调控的基因库并且进一步确定在人成纤维细胞中参与细胞迁移的靶分子。 实验方法: 我们采用RNA-Seq转录组学技术鉴定出在bFGF处理后,有显
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实验目的: 本研究旨在探讨bFGF调控的基因库并且进一步确定在人成纤维细胞中参与细胞迁移的靶分子。 实验方法: 我们采用RNA-Seq转录组学技术鉴定出在bFGF处理后,有显著性差异的基因和许多信号通路,并且采用qRT-PCR进一步验证。之后,我们采用Westernblot实验检测受bFGF和Wnt通路调控的关键蛋白,用大鼠皮肤创伤模型检测Wnt信号通路在皮肤愈合中所起的作用。运用小干扰RNA实验抑制内源性的β-catenin,同时进一步采用RNA-Seq转录组学技术鉴定出在β-catenin干扰后,总的转录组的变化情况。 实验结果: RNA测序实验结果显示在bFGF处理后,Wnt信号通路的基因发生了改变,包括Wnt2b,Wnt3,Wnt11,T-cell factor7(TCF7)和Frizzled8(FZD8)。并且,在LiCl(Wnt通路激活剂)与IWR-1(Wnt通路抑制剂)处理后,前者能促进成纤维细胞的迁移速率,而后者相反。此外,在bFGF处理后,GSK3β在ser9位点的磷酸化和核内的β-catenin均能上升。分子和生化实验提示PI3K信号能通过JNK激活GSK3β/β-catenin/Wnt信号通路,说明PI3K和JNK处于β-catenin的上游。β-catenin干扰后,细胞迁移速率降低。此外,RNA-Seq转录组学技术鉴定出β-catenin干扰后bFGF和FGF21的表达也下降。并且,Western blot实验表明FGF21与bFGF作用相似,能激活AKT和JNK,促进细胞迁移速率。 结论: 综上所述,本实验结果显示,在皮肤创伤愈合过程中,FGF与Wnt信号通路通过β-catenin形成反馈调节,促进创面愈合。
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