乳腺癌是威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之一,目前有若干相关分子标志物运用于临床指导乳腺癌的诊断、治疗与预后评价,但现有的证据还不足以解释乳腺癌的发病原因,因此,从分子水平深入研究其癌变机理,寻找新的标志基因仍然具有重要意义。HOXD10基因是同源异型盒基因家族成员之一,国外有学者研究显示其与人乳腺癌密切相关,可能是抑制乳腺上皮细胞发生癌变的相关基因,国内同类文献尚少见,因此,我们运用实时荧光定量RT-PCR方法检测HOXD10基因在我国乳腺癌患者中的表达情况。目的:探讨同源异型盒基因HOXD10基因在乳腺癌发生、发展进程中的作用,及其表达异常与临床病理参数之间的相关性。方法:1、收集44例新鲜乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织标本,将其分为乳腺癌组及乳腺良性病变组,组织离体后20分钟内置于液氮中,后转入-80℃冰箱保存。2、采用Trizol法抽提组织总RNA,提取得到的RNA采用M-MLV逆转录试剂盒逆转录合成cDNA第一链。3、从GeneBank检索human 18s rRNA和HOXD10基因的全长序列,采用oligo 6.0引物设计软件分别设计18s rRNA和HOXD10基因的引物。4、以cDNA为模板,经PCR反应分别扩增18s rRNA和HOXD10基因片断,制备相对定量标准品。5、以逆转录得到的cDNA为模板,进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Realtime RT-PCR),检测44例乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织HOXD10 mRNA表达,并分析HOXD10 mRNA表达与乳腺癌临床病理资料间的相关性。结果:1、用制备的相对定量标准品绘制的实时荧光定量RT-PCR试验的标准曲线,HOXD10基因标准曲线斜率(slope)为-4.120,相关系数(correlation coefficient)为1.00。18s rRNA基因荧光定量RT-PCR试验的标准曲线斜率(slope)为-3.863,相关系数(correlation coefficient)为1.00。均符合要求。2、HOXD10 mRNA在乳腺癌中表达范围为3.26~75.00,均值为25.25,在乳腺良性病变中表达范围为11.98~162.50,均值为78.32。乳腺癌中HOXD10 mRNA的表达明显低于乳腺良性病变,两组间有显著差异(P<0.01)。3、组织学分级为III级的标本中HOXD10 mRNA的表达明显低于其它2个组别。4、HOXD10 mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间未见相关性(P>0.05)。结论:1、乳腺癌组织HOXD10 mRNA表达明显降低,且组织学分级为III级的标本中HOXD10 mRNA的表达明显低于其它2个组别,考虑该基因可能为乳腺癌发生发展的抑制因子,提示我们对该基因应该给予更多关注。2、本次实验未发现HOXD10 mRNA表达减少与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间有明显相关性,此结论仍需进一步行大样本实验证实。3、本实验所用SYBR GREEN I实时荧光定量RT-PCR技术,选择新的相对定量方法,既能够准确定量,又有特异性强、灵敏度高等特点,同时极大简化了实验过程及试剂消耗,因此该方法适用于不同样品间mRNA表达量的比较。