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目的 采用成骨细胞与破骨细胞培养的方法,从破骨细胞分化调控因子OPG、RANKL变化的角度,部分揭示左归丸治疗骨质疏松症的作用机制,并为中医“肾主骨”机理的研究提供科学依据。 方法 1 左归丸含药血清的制备 将15只雌性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组、卵巢切除（OVX）组、OVX加左归丸组,每组5只。 OVX组和OVX加左归丸组:摘除这两组大鼠的双侧卵巢。在术后3个月,OVX加左归丸组大鼠灌服左归丸,一日2次,连续5次,于末次给药后1h,乙醚麻醉,无菌条件下,经腹主动脉采血,冷置1h后,离心（2500r/min,25min）,分离血清,是为含药血清,-20℃冰箱保存备用。 OVX组和正常对照组按以上程序,灌服等容积的蒸馏水,所取血清分别为OVX组血清和正常对照组血清。 2 破骨细胞所致骨吸收陷窝数目及面积的检测 2.1 成骨细胞与破骨细胞共同培养 在超净台内对96孔细胞培养板进行改装,在培养孔侧壁中部打孔,使相邻的两孔相通:其中一孔为成骨细胞培养室,另一孔为破骨细胞培养室,紫外线照射2h,做共培养用。 取第3代生长良好的成骨细胞,经胰酶消化,以终浓度1×104/ml接种到96孔细胞培养板的成骨细胞培养室,24h后细胞已牢固贴于孔底,然后将吸附破骨细胞的骨片加入破骨细胞培养室,置37℃,5%CO2培养箱中共同培养。 2.2 分组及含药血清的添加 本实验分为6组:破骨细胞（OC）+正常血清组、OC+OVX血清组、OC+OVX含药血清组、OB+OC+正常血清组、OB+OC+OVX血清组、OB+OC+OVX含药