论文部分内容阅读
疟疾(Malaria)是一种由疟原虫造成的,以按蚊为主要媒介传播的全球性急性寄生虫传染病。疟疾的临床症状主要发生在疟原虫裂殖子孢子在人体红细胞内无性增殖阶段,目前疟疾疫苗研究的热点主要是基于阻止此阶段疟原虫的无性裂殖来预防疟疾的感染和发病。恶性疟原虫裂殖子表面膜蛋白1C-末端的19kD片段(PfMSP119C)在裂殖子孢子侵染红细胞后仍然存在于红细胞表面,可诱导机体T细胞和B细胞产生免疫应答,因此是当前疟疾疫苗研制的重要候选抗原位点。家蚕杆状病毒表面展示技术是近几年发展起来的一种新的真核展示技术,通过将外源基因与家蚕杆状病毒的糖蛋白基因gp64融合可实现目的蛋白在病毒囊膜上的表面展示。该技术在单、多克隆抗体的制备、新疫苗的研制等领域已成为研究热点。本研究通过将MSP119c的基因片段连接到载体pFastBac1-gp64中,成功构建了真核供体质粒pFastBac1-gp64-MSP119c,该供体质粒转化E. coli DH10Bac感受态细胞后与家蚕Bacmid发生转座得到Bacmid-gp64-MSP119c。用该Bacmid-gp64-MSP119c通过脂质体介导法转染家蚕BmN细胞,在细胞内经过装配形成重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP119c并复制扩增获得大量重组病毒。通过PCR检测到MSP119c基因在家蚕BmN细胞中得到转录表达。用第三代BmNPV-gp64-MSP119c病毒以中等感染复数(MOI=10)接种家蚕蛹,7天后收集发病蚕蛹。Western Blotting及双向电泳检测表明重组杆状病毒在蚕蛹中表达了MSP119c蛋白,证明重组杆状病毒BmNPV-gp64-MSP119c重组成功。纯化重组病毒粒子免疫新西兰雄兔制备血清抗体,抗体经Protein A抗体纯化柱纯化后,通过ELISA检测发现抗体效价达到1:8000以上,表明该重组的病毒能有效刺激机体产生抗体。本研究证实了利用家蚕杆状病毒表面展示技术可有效将恶性疟原虫MSP119c蛋白展示在家蚕杆状病毒囊膜表面,并且该重组病毒作为免疫原能够刺激机体产生抗体和免疫细胞,这为一种全新的疟疾疫苗的研制奠定了基础。