【摘 要】
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目的探讨通过“自组装”( Self-Assembly)培养技术,以生长分化因子5(GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs),分化形成软骨组织的可能性及效果。方法将健康成人第3代hMSCs分别
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目的探讨通过“自组装”( Self-Assembly)培养技术,以生长分化因子5(GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs),分化形成软骨组织的可能性及效果。方法将健康成人第3代hMSCs分别用含GDF-5的软骨诱导液和无GDF-5的软骨诱导液定向诱导培养。软骨方向定向诱导3周后重悬细胞,接种于预铺琼脂糖的培养板,进行自组装培养,形成组织团块。对含GDF-5诱导和无GDF-5诱导培养的自组装组织团块经行大体观察; RT-PCR检测组织团块Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA的表达;HE染色观察自组装组织细胞结构;免疫组织化学、阿利新蓝染色、甲苯胺蓝染色检测诱导细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达。对免疫组织化学图像每个视野下阳性反应物的平均光密度进行测定,并对比两组进行比较。结果通过对hMSCs的自组装培养,形成了类似软骨的组织团块。Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达明显,免疫组织化学显示Ⅱ型胶原蛋白表达阳性,阿利新蓝染色和甲苯胺蓝染色显示蛋白多糖表达阳性。GDF-5诱导组自组装组织块Ⅱ型胶原、蛋白多糖mRNA表达明显大于无GDF-5对照组。GDF-5诱导组Ⅱ型胶原免疫组化平均光密度为(0.1678±0.0222),对照组平均光密度为(0.0908±0.0145),有统计学差异(P<0.05)。结论通过自组装法培养人骨髓间充质干细胞能够形成具有软骨分子生物学和组织学特性的组织团块,而GDF-5能够增强此过程中细胞的软骨表达。
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