抗生素hygrocins是从吸水链霉菌ATCC 25293中分离到的一种与雷帕霉素共结晶的浅黄色物质。根据结构可分为hygrocin A和hygrocin B。化学结构分析表明,hygrocins是一种新的安莎类抗生素,具有抗细菌活性。为了研究hygrocins的生物合成过程,本文构建了吸水链霉菌ATCC 25293的基因组文库,以安莎类抗生素前体3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合成过程中的关键酶-AHBA合成酶的氨基酸保守序列,设计引物来筛选文库。筛选得到的7个阳性cosmid克隆经过重叠图谱分析、亚克隆测序后,选择了同时含有AHBA酶系和聚酮合酶(PKS)基因的cosmid 13F11进行shotgun测序。在获得13F11的全部序列信息基础上,通过染色体步移获得了更多含有hygrocin生物合成基因的DNA片段。目前已完成2个cosmid的测序工作,得到55.444 kb的序列。生物信息学分析,发现该区域含有前体AHBA合成所必须的五个AHBA酶系基因、五个聚酮合酶基因、三个氧化酶基因及其它可能与合成后修饰、转录调节及运输等相关的基因。为验证所获得的生物合成基因簇的功能,分别构建了AHBA合成酶基因hgnI和聚酮合酶基因hgnE的中断质粒,经过接合转移导入吸水链霉菌ATCC 25293中,通过同源重组中断了这两个基因。HPLC分析表明AHBA合成酶基因和PKS基因的中断菌株都丧失了合成hygrocins的能力,从而证实所克隆的hygrocins生物合成基因簇的正确性。