干巴菌(Thelephora ganbajun Zang),属担子菌门(Basidiomycota)、革菌科(Thelephoraceae)、革菌属(Thelephora),是云南省珍稀的野生食用菌,具有较高的营养价值和经济价值。目前对于干巴菌的报道大多集中在形态结构、干巴菌成分的分析、遗传差异以及生态效应方面,对于干巴菌基因和生长机理方面的研究甚少。本研究主要运用实时定量PCR技术来测定干巴菌生长的不同土壤深度和范围的菌丝体含量,从而探究干巴菌的生长和子实体形成机理。通过对干巴菌单拷贝基因和多拷贝基因测定土壤菌丝体含量的比较,探讨单拷贝基因和多拷贝基因测定土壤菌丝体的优缺点和可行性。本研究应用多拷贝基因实时定量PCR方法对云南常见的外生菌根真菌铜绿菌(Lactarius hatsudake)进行了土壤菌丝体含量的测定,发现干巴菌与铜绿菌在子实体形成过程中土壤的菌丝体含量及分布存在一定的差异性。本研究得出的主要结果如下:1、目前现有的单拷贝基因引物主要针对口蘑属,本研究摸索了其引物对干巴菌DNA的扩增,结果没有获得单一条带和有效序列,因此现有单拷贝基因引物不适用于干巴菌单拷贝基因的扩增。本研究通过基因组比较,找到了干巴菌的单拷贝基因,在此基础上设计并验证了特异性引物;通过比对铜绿菌与相近物种的ITS序列设计并验证了特异性引物。上述两对特异性引物的成功合成,为土壤中菌丝体含量的实时定量测定提供可实施的必要条件。2、多拷贝基因与单拷贝基因实时定量PCR测定方法的结果有成倍增加和减少的趋势大体一致,但也存在一定的差异。两种基因测得的干巴菌菌丝体含量,比值在1-29之间。少量样品比值差异性较大,倍数在1-3左右,而比值在5-16之间的占总数的57.14%。如果测定干巴菌菌丝体含量用来研究干巴菌菌丝体的分布状况,也可以考虑使用多拷贝基因来测定作为参考。3、根据实时定量PCR测定土壤菌丝体含量分析比较发现铜绿菌与干巴菌子实体形成的过程存在较大差异,土壤中干巴菌菌丝体分布不具菌塘规律性,铜绿菌菌丝体在土壤中分布具有一定的规律性。推断铜绿菌在子实体形成过程中,可能其菌丝侵入植物体根部,吸收根部的营养物质,菌丝体含量逐渐增多并在土壤中逐渐向外延伸,当土壤环境较为适合时,铜绿菌菌丝体逐渐聚集增多形成菌塘,从而形成子实体。4、通过观察发现干巴菌在子实体的形成过程中,其菌丝侵入松树等的根部,进入根部细胞间隙,然后向根外延伸形成二叉分支结构的菌根,而后菌根逐渐增多聚集,聚集到一定程度时形成子实体。在此过程中有少量菌丝体分散在土壤中,但不形成菌塘。根据这一特征,在干巴菌的人工栽培过程中,可以通过提高干巴菌侵染以及控制寄主松树的生长状况来实现,但还需进一步探索。