双氢青蒿素大鼠药代动力学研究双氢青蒿素是经世界卫生组织推荐的用于治疗疟疾的药物。最近,中药研究所某团队拟进一步开发双氢青蒿素,使其用于治疗中枢神经病理疼痛。为此,我们对该化合物开展了大鼠药代研究以支持双氢青蒿素临床适应症的拓展。早前,曾有学者采用放射性同位素标记技术开展了双氢青蒿素的大鼠药代研究,然而该分析技术没有区别双氢青蒿素原形化合物及其代谢物。由于双氢青蒿素的药效活性主要来自原形化合物,因此过去的分析手段给药代研究带来一定的局限。为此,我们采用液相色谱-质谱联用技术建立检测大鼠样品中双氢青蒿素原形化合物浓度的分析方法,并以此考察了双氢青蒿素的大鼠药代动力学特征（包括胃肠道吸收、组织分布及肝肾排泄等）。基于液相色谱-质谱联用技术,我们建立了能够灵敏、可靠、快速检测给药后大鼠血浆、组织匀浆、尿、粪和胆汁等大鼠样品中双氢青蒿素原形化合物的定量分析方法,并参考国家药品监督管理局（NMPA）于2014年颁布的《药物非临床药代动力学研究指导原则》,开展了分析方法的可靠性验证。所有大鼠药代实验方案均经中药研究所动物伦理委员会审核批准,大鼠药代实验按批准后方案实施,双氢青蒿素的给药剂量参考相关药效研究所用给药剂量（单次静脉给药剂量为4 mg/kg、单次灌胃给药低、中、高剂量分别为4、8和32 mg/kg,连续7天灌胃给药的每日一次的剂量为8 mg/kg）。双氢青蒿素的药动学参数计算采用非房室模型处理（使用Phoenix（?）WinNonlin（?）8.2软件;美国）。针对双氢青蒿素所建定量分析方法的选择性高,线性定量范围为1-729 ng/mL,批内及批间准确度为87.0%-114%,批内及批间精密度为1.07%-12.7%,残留度<20%,相对基质效应<15%、模拟分析方法主要步骤的稳定性>87.2%,样品稀释可靠性97.3%-107%。灌胃给药后,双氢青蒿素吸收较快（Tmax,0.25-0.45h）,其口服生物利用度（F）均低于30%,雄性大鼠的为3.6%-22.5%、雌性大鼠的为6.6%-25.1%,大鼠个体间差异较大。灌胃给药后,双氢青蒿素在雄鼠体内血浆AUC0-∞和血浆Cmax均随剂量（4-32 mg/kg）的增加而增加,但线性关系不确定;在雌鼠体内血浆AUC0-∞和血浆Cmax均不随剂量（4-32 mg/kg）的增加而增加,为非线性相关。静注给药后,双氢青蒿素的总清除率（CLtot,p）为9.2-9.7 L/h/kg,约为大鼠肝血流量的2.8-2.9倍;稳态表观分布容积（Vss）为2.2-2.5 L/kg,是大鼠总体液体积的3.3-3.8倍;消除半衰期很短（t1/2,0.18 h;比灌胃给药的短,0.3-0.8 h）。连续7天灌胃给药后,双氢青蒿素第7天的雄鼠血浆AUC0-∞第1天的无明显差异（P>0.05）,雌鼠的第7天比第1天的显著降低（P<0.01）。大鼠灌胃给药后,除睾丸外和雌鼠心脏外,双氢青蒿素在其他组织均有分布,组织中的浓度普遍高于对应时间点的血药浓度（这与其较大的Vss数值基本一致）,其中在雌鼠卵巢中的浓度较高,但在大脑浓度低。在胃、小肠和大肠中浓度高是由于给药后化合物在消化道组织吸附且采样时不易被冲洗掉。双氢青蒿素在组织中的浓度变化,大多与血药浓度的变化有随动性。双氢青蒿素原形化合物在尿液中的排泄分数很低（fe-U,0.007%-0.05%）,在胆汁中的排泄分数也很低（fe-B,0.09%-0.15%）,提示双氢青蒿素主要通过代谢从机体清除。双氢青蒿素的体内代谢将由研究团队的其他成员完成。补骨脂香豆素类成分血药浓度检测方法建立及应用补骨脂的香豆素类成分有雌激素样、抗肿瘤、抗炎、抗菌和抗抑郁的药效活性,与补骨脂肝、肾和生殖毒性相关。在2020版《中国药典》中,补骨脂素和异补骨脂素被用作补骨脂药材的质量分析方法的被测成分,并规定补骨脂药材中补骨脂素和异补骨脂素的总含量不得低于0.7%。为了开展与补骨脂安全用药相关的药代研究,我们建立了一种同时检测大鼠血浆样品补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷和异补骨脂苷浓度的分析方法。分析条件的优化集中于:样品前处理（采用乙腈蛋白沉淀方法）、色谱分离（采用C18反相色谱柱,以水和乙腈为流动相）、质谱检测（在ESI正离子模式下,根据离子对m/z 187.0/131.0,187.1/131.1,384.2/205.2,384.2/205.1 分别检测补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷、异补骨脂苷）。新建分析方法的可靠性考察,参考了 NMPA于2014年颁布的《药物非临床药代动力学研究指导原则》。分析方法的线性定量范围为0.5-364.5 ng/mL（补骨脂素和异补骨脂素）及1-729 ng/mL（补骨脂苷和异补骨脂苷）,批内及批间准确度为89.9%-104%,批内及批间精密度为3.10%-12.2%,其技术指标均达到要求。我们发现,补骨脂苷和异补骨脂苷是补骨脂水煎液的两个主成分,含量分别为45600和24000 μg/mL,补骨脂素的含量为补骨脂苷的1.71%、异补骨脂素的含量为异补骨脂苷的2.40%。大鼠灌胃给药补骨脂水提物（6g药材/kg;补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂苷、异补骨脂苷的成分剂量分别为2.35、1.73、137和72 mg/kg）。大鼠单次灌胃给药补骨脂提取物后,补骨脂苷和异补骨脂苷的血药浓度达峰时间（Tmax:1.0-2.7h）明显早于补骨脂素和异补骨脂素的Tmax（5.5-6.7h）。与在成分含量上的差异不同,补骨脂素和异补骨脂素血浆AUC0-∞（分别为443619-582680和167314-276903 ng·h/mL）相对高于补骨脂苷和异补骨脂苷的血浆AUC0-∞（分别为 5866-13745 ng·h/mL 和 12804-28571 ng·h/mL）,提示体内代谢是影响补骨脂提取物灌胃给药后成分暴露的一个重要因素。大鼠连续7天灌胃给药补骨脂提取物后,补骨脂素和异补骨脂素第7天的血浆AUC0-∞比第1天的明显降低（P<0.05）。补骨脂苷和异补骨脂苷在雄鼠体内第7天的AUC0-∞也较第1天的明显降低（P<0.05）,且t1/2和MRT变短,表明这两个化合物从体内的清除加快,提示后续研究应关注连续给药补骨脂提取物对其香豆素成分带来的影响。