【摘 要】
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新采收烟草种子存在光休眠,黑暗下不能萌发,后熟可释放光休眠。已有研究表明光敏色素调控需光性种子萌发,但其是否参与调控种子光休眠与后熟的功能及作用机制目前尚不清楚。本研究以WT(K326)、NtPHYB1K326-GFP过表达(B1、B3、B4)和NtPHYB1K326-RNAi缺陷(B5、B6、B7)T3代新采收与后熟种子为材料,通过解剖实验,研究完整种子、去种皮种子和离体胚的萌发差异,在此基础上
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新采收烟草种子存在光休眠,黑暗下不能萌发,后熟可释放光休眠。已有研究表明光敏色素调控需光性种子萌发,但其是否参与调控种子光休眠与后熟的功能及作用机制目前尚不清楚。本研究以WT(K326)、NtPHYB1K326-GFP过表达(B1、B3、B4)和NtPHYB1K326-RNAi缺陷(B5、B6、B7)T3代新采收与后熟种子为材料,通过解剖实验,研究完整种子、去种皮种子和离体胚的萌发差异,在此基础上研究3种类型种子对赤霉素(GA3)、多效唑(Paclobutrazol;PAC)、脱落酸(ABA)和氟啶酮(Fluridone)的敏感性。通过液相色谱串联质谱研究新采收种子萌发过程中内源GAs和ABA含量的变化。通过实时荧光定量PCR,研究新采收和后熟种子萌发过程中光敏色素PHYB1基因、GA和ABA代谢与信号基因(GA3ox2、GA2ox2、GAI、NCED6、CYP707A1、ABI3、ABI5)及萌发相关基因(XTH2、TOC1)的表达水平。研究结果如下:(1)光照条件下,野生型新采收和后熟种子萌发过程中XTH2表达上调,NCED6、ABI3、ABI5、GA2ox2、TOC1表达下调;野生型新采收种子萌发初期GA3ox2和CYP707A1的表达上调。激素定量分析表明,在光下新采收种子萌发过程中ABA的含量逐渐下降,活性GAs的含量呈先升高后下降的趋势;而在暗下萌发过程中ABA的含量逐渐上升,活性GAs的含量无明显变化。说明光休眠种子萌发过程中通过控制GA和ABA信号与代谢基因的表达及含量,进而调节ABA/GAs比值的变化,调控种子的休眠与萌发。(2)种子后熟可促进GA3ox2、CYP707A1、XTH2的表达,抑制NCED6、ABI3、ABI5、GA2ox2、GAI、TOC1的表达;另外,随后熟时间的延长,种子逐渐丧失对外源GA3、ABA、PAC、FLU的敏感性。(3)NtPHYB1具有协同光照调控新采收种子光休眠的功能。光下新采收与后熟种子萌发无显著差异,而暗下种子萌发率显著降低;外源添加GA3和后熟可促进暗下种子的萌发,与其它2种类型种子相比,NtPHYB1K326-RNAi种子在暗下的萌发率更低。(4)NtPHYB1K326-RNAi种子中NCED6表达水平显著高于野生型和NtPHYB1K326-GFP种子,新采收与后熟种子均表现为相似规律;NtPHYB1K326-RNAi种子对外源ABA、PAC、FLU的敏感性也较其它2种类型种子要高。说明PHYB1可能通过介导ABA信号与代谢基因的表达调控种子的光休眠与后熟。(5)NtPHYB1具有协同变温调控烟草种子后熟的功能,自然变温环境有利于野生性和过表达NtPHYB1K326-GFP种子的后熟,而恒温环境有利于缺陷体NtPHYB1K326-RNAi种子的后熟。(6)去种皮种子在光照和黑暗下能萌发,而离体胚在2种环境下均不能萌发。
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