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内膜异位症是一种常见的、良性、雌激素依赖的慢性妇科疾病。盆腔内异症在妇女中的发病率为6-10%,在患不孕或疼痛的妇女中发病率高达35-50%。疼痛是内异症的主要临床表现之一,如痛经、深部性交痛、便痛和慢性盆腔痛等。因为该病雌激素依赖的特性,现在常用的GnRHa一般对内异症引起的疼痛是有效的,但该药用药时间有限,且在许多严重疼痛的病例,用药时疼痛症状都可能复发。TRPV1(Transient Receptor Potential Vanilloid Type1, TRPV1)是伤害性感受器上的配体门控的非选择性阳离子通道,是瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)家族的成员。TRPV1在伤害痛觉感受中的作用已经被TRPV1基因敲除的小鼠证实,例如TRPV1敲除的小鼠不能表现氮芥油或完全Freund’s佐剂介导的炎症引起的痛觉过敏,这些都提示TRPV1对炎症痛觉伤害感受中的必须作用。TRPV1与痛觉的发生、传导及敏化在中枢神经系统中已进行了大量的研究,而内异症病灶中是否存在TRPV1及其具体功能尚未见诸报道。本课题根据内异症疼痛的炎性特征,在内异症所致痛觉发生的源头探讨疼痛可能发生的原因。第一部分TRPV1在内异症中的表达目的：检测TRPVl在内异症中的表达并分析其与内异症患者疼痛严重程度的相关性。方法：选取2007-2009年在复旦大学妇产科医院因内异症进行手术的68例患者的异位内膜和24例正常对照的子宫内膜,用免疫组织化学的方法检测内异症患者异位内膜和正常对照内膜中TRPV1的表达,用免疫荧光的方法检测内异症患者异位内膜中TRPV1表达的神经纤维。结果：1. TRPV1在异位内膜中的表达高于正常内膜(P<0.05); TRPV1在内异症患者中主诉无痛和不同程度的疼痛组间差异是有统计学意义的(P<0.05)；异位内膜中TRPV1的表达与患者疼度程度相关(P<0.05)。2.内异症患者异位灶中TRPV1表达的神经纤维在无痛和有疼痛主诉的患者中检出率分别为26.3%和53.1%,而且随着疼痛程度的增加,检出率也是增加的；TRPV1表达的神经纤维密度(x±SD/mm2)在无痛和有痛组中分别为0.2±0.12和0.4±0.27,而且随着疼痛程度的增加,其密度也相应增加。结论：TRPV1在异位内膜中的表达和TRPV1阳性的神经纤维都随着疼度程度的升高而增加。第二部分PGE2和TNF-α对TRPV1在原代培养的异位内膜基质细胞中表达的影响目的：内异症是一种炎性疾病。内异症患者腹腔中巨噬细胞和多形核白细胞激活介导PGE2和细胞因子的产生。多个研究发现致炎细胞因子、前列腺素、趋化因子、NO等是与疼痛程度相关的。PGE2和TNF-a在内异症患者腹腔液或卵巢内膜样囊肿的囊液中浓度是升高的。在前一部分实验中我们发现TRPV1在异位病灶中的表达是高于正常内膜的,本部分实验检测内异症中常见的致炎因子是否能影响TRPV1在异位内膜基质细胞中的表达。方法：原代培养异位的子宫内膜基质细胞。用PGE2(10-8M)和TNF-α(1uM)处理异位基质细胞,用RT-Realtime PCR和Western Blot的方法分别检测TRPV1mRNA和蛋白表达的变化。结果：在PGE2和TNF-a的刺激下,异位内膜基质细胞中TRPV1mRNA和蛋白的表达都明显升高。结论：致炎因子PGE2和TNF-a可以刺激异位内膜基质细胞中TRPV1表达的升高。第三部分内膜基质细胞中TRPV1通道的电生理学特性和功能研究目的：对神经元细胞中TRPV1通道的电生理学特性和其在痛觉中的作用已经进行了大量的研究,而这一切对异位内膜基质细胞中的TRPV1还未见诸报道。本部分对异位内膜基质细胞膜上TRPV1通道的基本电生理学特性和痛觉相关的一些功能进行了初步研究。方法：原代培养异位和正常的子宫内膜基质细胞。用膜片钳记录TRPV1的特异性激动剂辣椒素(capsaicin,CAP)对基质细胞膜电流的影响。用钙成像的方法检测capsaicin对内膜基质细胞内Ca2+浓度([Ca2+])的影响,检测PGE2预处理对capsaicin引起异位内膜基质细胞内Ca2+浓度变化的影响。用NO检测试剂盒和elisa试剂盒分别检测capsaicin对异位内膜基质细胞分泌致痛相关因子NO和IL-1β的影响。结果：1.膜片钳检测发现capsaicin(1uM)可以激发异位内膜基质细胞产生外向型膜电流,且没有脱敏现象。2.钙成像发现辣椒素(1uM)灌流可以明显的降低细胞内[Ca2+]浓度,冲洗后细胞内[Ca2+]可以恢复；异位基质细胞内Ca2+外流的幅度要高于正常对照的基质细胞(n=10); PGE2(1uM)可以增加异位内膜基质细胞中capsaicin引起的Ca2+的外流(n=10)(P均<0.05)。3. Capsaicin可以增加异位基质细胞中NO、IL-1β的分泌。结论：1.异位内膜基质细胞中TRPV1是具有功能的,在激活后其可以产生外向的Ca2+电流。2.TRPV1可以增加异位内膜基质细胞中致痛相关因子如NO、IL-1β的分泌。