桑树钙调蛋白基因cDNA克隆分析及桑属植物分子系统学研究

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桑树是多年生的重要经济作物,桑叶是家蚕的优良饲料。我国作为世界蚕业的发祥地和起源中心,拥有世界上最为丰富的桑树种质资源,是一个桑树资源大国。但是,与其它植物相比,我们在桑树功能基因克隆等方面都处于落后状态。蚕业作为我国传统的优势出口创汇产业,一旦主要桑树功能基因的控制权旁落它国,将对我们的桑产业会造成不可估量的影响。所以,我们应该立足于我们的资源优势,开展桑树功能基因挖掘研究。另外,利用丰富的桑树种质资源开展桑属系统发育和分子进化研究,对丰富的桑树遗传资源收集、整理、保存和创新利用有着重大意义。本文研究内容如下: 利用SMART 技术(Switching Mechanism At 5 end of RNA Transcript)构建丰驰桑幼苗cDNA文库,从中获得两个cDNA序列,两条序列的读码框均为450 bp,均包括完整的3端非翻译区;序列比对分析发现,两条序列ORF(open reading frame)同源性为86%,核苷酸差异大多数发生在第3位密码子上;将其氨基酸序列与GenBank上登陆的拟南芥ACaM-7等的氨基酸序列进行比对,同源性均在98%以上,说明是2个钙调蛋白基因,命名为MCaM-1,MCaM-2;其中MCaM-1与拟南芥的CaM7、胡萝卜的CaM4的氨基酸同源性达100%。这表明钙调蛋白序列在植物中相当保守。 用PCR产物直接测序法对桑科桑属、构属等属的14份材料的trnL基因内含子序列进行了测定:该序列长度变异范围为534~561 bp;平均核苷酸组成为0.39100(A) 0.27114(T) 0.17679(C) 0.16086(G),平均A+T含量为0.66214说明该序列富含A/T。利用rps16基因内含子对桑科桑属、构属等属的20份材料进行了分子系统学研究,各供试材料rps16基因内含子长度在887~922 bp之间;平均核苷酸组成为0.36055(A) 0.31305(T) 0.14215(C) 0.18435(G),平均A+T含量为0.67360,说明该序列富含A/T。用软件对所得序列进行分析并构建了其系统发育树。构建的两棵系统树均显示桑属所有材料聚为一类,进一步证明桑属为单系,并探讨了桑属的亲缘关系。用两个标记进行的分析结果有很多的相似处,但也有差异。
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