奶牛隐性乳房炎(Subclinical Mastitis,SCM)又称奶牛隐性乳腺炎,是乳腺在致炎因素作用下发生的炎症变化。该病无明显的临床症状,仅在乳汁理化性质、体细胞含量等方面发生改变,因此不易察觉,具有较高的隐蔽性。在众多致炎因素中,病原微生物感染是其最主要的原因之一。目前已发现超过150种病原微生物能够引起奶牛隐性乳房炎,其中葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌为最主要的3种病原微生物。目前,针对隐性乳房炎病原微生物的研究主要以葡萄球菌和链球菌为主,针对大肠杆菌在奶牛隐性乳房炎中的致病作用及机理研究并不多见。因此,本研究主要对隐性乳房炎大肠杆菌进行研究,对其耐药性及产生耐药性的分子机制进行初步研究,为探讨大肠杆菌在奶牛隐性乳房炎发病过程中的作用及机制,以及奶牛隐性乳房炎的治疗及综合防控提供帮助。隐性乳房炎病牛泌乳量降低,乳汁品质严重下降,造成乳品企业巨大的经济损失。同时乳汁中病原微生物含量增高,对食品安全构成威胁。因此对奶牛隐性乳房炎进行积极地筛查、治疗,对提高经济效益、保障食品安全及人类健康意义重大。抗菌药物治疗是奶牛隐性乳房炎首选的治疗方案之一,但随着抗菌药物的不断使用,耐药病原微生物逐渐增多,给疾病治疗带来困难。固有耐药和获得性耐药是病原微生物产生耐药性的2个主要途径,其中获得性耐药由于能够介导细菌对多种抗菌药物、不同水平的耐药,而成为细菌产生耐药性及临床治疗失败的主要原因之一。整合子-基因盒系统,是上世纪发现,广泛分布于多种细菌中的耐药性获得及传递系统。该系统由整合子和基因盒2部分构成,其中整合子无法自由移动,需依靠噬菌体、接合性质粒等移动元件进行传递。基因盒则可携带不同耐药基因,以闭合环状结构存在于环境中。当携带耐药基因的基因盒被整合子捕获、整合后,细菌则获得相应的耐药性。目前已发现9类整合子广泛分布于多种细菌中,通过对40余种不同基因盒的整合与传递,介导细菌耐药性的产生。本研究通过对辽宁奶牛主要养殖区的沈阳、阜新、锦州3市,9个不同规模奶牛饲养场进行乳汁体细胞检测,对隐性乳房炎进行筛查,调查该地区奶牛隐性乳房炎发病情况。同时对隐性乳房炎大肠杆菌进行分离、鉴定。结果表明,该地区奶牛隐性乳房炎患病率为34.7%,沈阳、阜新、锦州地区患病率分别为34.5%、34.2%和35.8%。经鉴别培养、生化反应鉴定,共分离到隐性乳房炎大肠杆菌88株。本研究采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,测定21种抗菌药物对88株隐性乳房炎大肠杆菌分离株的最小抑菌浓度,评价分离株耐药水平。结果表明,分离株对甲砜霉素、氟苯尼考、磺胺间甲氧嘧啶和磺胺甲基异恶唑耐药率较高,分别为97.7%、88.6%、87.5%和73.9%;对乙酰甲喹、氨苄西林、头孢噻呋、氧氟沙星和环丙沙星敏感,敏感率分别为95.5%、94.3%、94.3%、93.2%和90.9%;对庆大霉素和阿米卡星高度敏感,未发现耐药菌株。本研究应用PCR方法,对88株隐性乳房炎大肠杆菌分离株整合子-基因盒耐药系统携带情况进行调查,并分析整合子-基因盒携带情况与分离株耐药表型之间的关系。结果表明,21株为I型整合子阳性分离株,检出率为23.9%;分离株中未发现II型整合子。在21株I型整合子阳性分离株中,共筛出5类耐药基因盒,分别为dfr A12-aad A2、aar-3、dfr A15-aad A2、aad A1-dfr A15、smr,分离率分别为81.0%、9.5%、61.9%、19.0%、47.6%。根据病原微生物分离、鉴定,及药物敏感性试验结果,对隐性乳房炎病牛进行针对性治疗。治疗试验分未治疗组、青-链霉素治疗组、头孢噻呋钠治疗组、庆大霉素治疗组4组。结果表明,未治疗组的隐性乳房炎自愈率为8.1%,其他3组的治愈率分别为76.9%、96.9%和80.6%,头孢噻呋钠乳房灌注治疗效果最佳。而基于药物敏感性试验制定的治疗方案,其治愈率高于传统“青-链霉素”治疗方案。综上所述,基于病原微生物鉴定及药物敏感性试验而制定的治疗方案,在奶牛隐性乳房炎治疗中,能够在保证治疗效果的同时,减少广谱、超广谱抗菌药物的使用。为制定合理、有效的奶牛隐性乳房炎治疗方案,提供坚实的理论基础。