【摘 要】
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本文主要以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)和转Bt基因水稻秸秆为材料,研究紫外线辐照、60Co Y射线辐照、蛋白酶、土壤分离微生物对Bt蛋白的降解作用,实验结果
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本文主要以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)和转Bt基因水稻秸秆为材料,研究紫外线辐照、60Co Y射线辐照、蛋白酶、土壤分离微生物对Bt蛋白的降解作用,实验结果如下:(1)紫外线辐照可以降解Bt细菌中的Bt蛋白,降解率与紫外灯功率,Bt细菌与紫外灯间距离及辐照时间有关。紫外灯功率越大、距紫外灯距离越小、辐照时间越长,Bt蛋白降解率越高。在40 w紫外灯下20 cm处辐照24 h,Bt蛋白基本完全降解。(2)60Coγ射线辐照可以降解Bt细菌中的Bt蛋白,Bt蛋白降解率随60Coγ射线辐照剂量增大而提高,但辐照剂量超过2 kGy时,Bt蛋白降解率无显著增加。(3)Bt细菌中提取的Bt蛋白在6 h内基本不会降解,且在6 h内温度、振荡等因素对Bt蛋白的降解无显著影响。(4)在酶的最适作用条件下,所选7种蛋白酶均可降解Bt细菌中提取的Bt蛋白,但在30℃,pH 7.0时只有菠萝蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶可以完全降解Bt蛋白。综合考虑价格、应用等因素后,最终选取中性蛋白酶作进一步研究。向1 m1饱和Bt蛋白溶液中加入12 U中性蛋白酶,使二者在30℃下反应20 min后,Bt蛋白可完全降解。中性蛋白酶也可降解转Bt基因水稻秸秆中Bt蛋白,且降解率与酶底比、酶解温度及酶解时间均呈正比。(5)从土壤中筛选出一株可高效降解Bt蛋白的FJB3细菌。将FJB3细菌培养24 h后,取0.05 ml发酵上清液加入到9.95 m1饱和Bt蛋白溶液中,在30℃下反应4 h后,Bt蛋白完全降解。此外,FJB3细菌也可以降解转Bt基因水稻秸秆中的Bt蛋白。在25℃下,Bt蛋白降解率最高,且Bt蛋白降解率随发酵时间延长而提高。发酵5 d后Bt蛋白降解率达59.63%,发酵30 d降解率可达83.53%。
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