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幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)与胃癌的关系密切。细胞毒素相关基因A蛋白(cytotoxinasso-ciatedgeneA,CagA)是H.Pylori重要的毒力因子之一。依据CagA基因型的不同,H.pylori可以分为东亚型和西方型菌株。研究显示,东亚型菌株的毒力强于西方型菌株。Bcl-xL是一种凋亡抑制基因,研究显示,Bcl-xL基因在肿瘤的发生发展中扮演着重要的作用。
目的:
研究东亚型和西方型H.plyori刺激人胃癌细胞BGC-823后,对细胞中凋亡抑制基因Bcl-xL表达的影响。以此阐明东西方菌株之间的毒力差异和致病力的差异,以及影响菌株毒力差异的可能的机制,并探讨Bcl-xL基因在胃癌BGC-823细胞增殖中所起的作用。
方法:
1.分别用东亚型、西方型H.pylori菌株超声裂解液刺激胃癌细胞BGC-823,MTT法分析刺激后胃癌BGC-823细胞增殖情况。2.荧光定量PCR(RT-PCR)检测胃癌细胞BGC-823凋亡抑制基因Bcl-xLmRNA表达水平。3.设计特异的Bcl-xLshRNA转染胃癌BGC-823细胞,沉默Bcl-xL基因的表达。4.MTT法分析Bcl-xLshRNA转染后的胃癌BGC-823细胞增殖抑制情况。
结果:
1.Hpylori超声裂解液作用胃癌BGC-823细胞24h后,MTT显示细胞增殖。与对照组相比,东亚型处理组细胞增值率为29.7%(P＜0.01),西方型处理组细胞增值率为18.7%(P＜0.01);与西方型处理组相比,东亚型处理组细胞增值率更高(P＜0.05)。2.H.pylori超声裂解液作用胃癌BGC-823细胞24h后,可以上调BGC-823细胞中Bcl-xLmRNA水平的表达。与对照组相比,东亚型处理组细胞中Bcl-xLmRNA水平上调了2.39倍(P＜0.01),西方型处理组细胞中Bcl-xLmRNA水平上调了2.06倍(P＜0.01);与西方型处理组相比,东亚型处理组细胞中Bcl-xLmRNA水平表达量更高(P＜0.05)。3.Bci-xLshRNA可以沉默Bcl-xLmRNA、蛋白的表达。Bcl-xLshRNA质粒转染BGC-823细胞24h时后,与对照组及Bcl-xLshRNA阴性组相比,Bcl-xLmRNA水平明显的下调;转染72h时后,与对照组及Bcl-xLshRNA阴性组相比,Bcl-xL蛋白表达水平也明显下调。4.Bcl-xLshRNA质粒分别转染BGC-823细胞24h、48h和72h后,与对照组及Bcl-xLshRNA阴性组相比,BGC-823细胞的增殖抑制率分别为7.5%、24.7%、53%(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01)。
结论:
1.H.pylori超声裂解液中的生物活性物质通过上调Bcl-xL基因的表达促进胃癌BGC-823细胞的增殖,并且东亚型H.pylori比两方型H.pylori具有更强的生物活性。2.Bcl-xLshRNA可以下调胃癌BGC-823细胞中Bcl-xL基因表达,并抑制胃癌BGC-823细胞的增殖。