论文部分内容阅读
目的:EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属疱疹病毒科γ亚科成员,与多种人类肿瘤的发生密切相关,如Burkit’s淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)、何杰金病(Hodgkin’s disease,HD)、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)、乳腺癌以及胃癌(gastric carcinoma,GC)等。有研究表明有超过90%成人感染过EBV,但EBV相关肿瘤的分布则具有明显的地域性和人群倾向性,除环境因素和遗传因素外,是否存在与EBV相关肿瘤有关的EBV基因变异一直是倍受关注的热点问题。本研究选择青岛和广州地区EBV阳性鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织作为研究对象,对EBV核抗原(EBV nuclear antigen,EBNA)2编码基因的多态性进行检测和分析,旨在探讨EBV基因多态性及其在EBV阳性NPC发生中的意义。方法:(1)聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结合DNA测序检测EBV阳性NPC标本中EBNA2基因的多态性,应用DNAStar 5.0软件中Meg Align对序列进行对比分析,并与EBV标准株B95-8序列进行比较。(2)根据测序结果,将其序列标准化处理后,应用DNAStar 5.0软件生成系统树。(3)根据各基因出现的共有突变结合系统发生树对各基因变异进行分类,初步分析基因变异对相关基因功能的影响。(4)测序结果与我们前期对青岛地区EBV阳性鼻咽癌的检测结果进行比较。结果:本研究广州地区32例EBV阳性NPC及39例TW标本EBNA2基因扩增及测序成功,根据系统发生树中EBNA2的变异模式以及以往EBNA2基因多态性的研究结果,鉴定归纳出E2-A,E2-C和B95-8样3种亚型。(1)E2-A为最常见的亚型(38/71,52.1%),NPC1为其代表株,该亚型有5个共有突变,包括2个错义突变aa476(Glu→Gly/Trp)和aa486(Ile→Thr),3个同义突变aa370(cct→cca),aa417(acg→aca)和aa470(tca→tct)。有6个其它散在的突变,分别为aa331(Pro→Leu),aa383(cct→cca),aa390(ggt→gga),aa411(Val→Ile),aa438(Ile→Leu)和aa484(Pro→His)。(2)E2-C为次要亚型(NPC3为代表株),该亚型存在1处共有突变(aa370,cct→cca)和2个aa缺失(aa357和358),有3处散在的突变分别为aa378(Ger→Tyr),aa411(Val→Ile)和aa451(Pro→His)。值得注意的是,我们发现E2-C亚型与GD1株序列高度一致,而GD1一直作为我国南方地区NPC的代表毒株。(3)B95-8样亚型为最少见一类亚型(代表株为TA56),仅有aa370一个位点的变异(cct→cca)。(4)统计学分析结果显示,NPC和健康人群TWs中3种EBNA2亚型的分布有明显差异(P<0.01),NPC中E2-A亚型所占比例(71.9%,22/32)明显高于TW(38.5%,15/39),TW中B95-8样亚型所占比例(25.6%,10/39)明显高于NPC(0%,0/32)。结论:(1)E2-A亚型是中国南北方地区的优势流行株。(2)EBNA2各亚型在NPC和TW中分布差异明显,提示E2-A亚型与NPC的发生密切相关,而B95-8样亚型在健康人群中更为常见。(3)E2-A亚型在广州和青岛地区NPC组织中均高频出现,但广州地区NPC组织中E2-A亚型的出现频率远高于青岛地区,提示EBNA2基因变异具有肿瘤特异性而非仅仅地域性变异。