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目的:研究HP-HA-肝ECM水凝胶(肝素-透明质酸-肝脏细胞外基质水凝胶)制备方法及细胞相容性,为组织工程化涎腺类器官的体外构建提供具有生物活性、能缓释生长因子、有利于自组装的三维培养生物支架材料。方法:1、切取新鲜大鼠肝脏组织,使用冻融法、Triton X-100洗涤及胃蛋白酶溶解结合机械震荡法进行脱细胞制备,HE染色法及DAPI染色法对其脱细胞效果进行检测。2、将脱细胞后的肝脏ECM交联肝素-透明质酸水凝胶,制备HP-HA-肝ECM水凝胶。3、HP-HA-肝ECM水凝胶的细胞相容性检测1)分离、培养并鉴定大鼠下颌下腺细胞:切取新鲜的大鼠下颌下腺,采用组织块法培养下颌下腺细胞,传代并纯化,使用免疫荧光法检测α-淀粉酶和免疫细胞化学方法检测CK7的表达。2)CCK-8法和Live/Dead细胞染色法评估HP-HA-肝ECM水凝胶的细胞相容性:将第2代鼠下颌下腺细胞接种到HP-HA-肝ECM水凝胶上(实验组),对照组不用HP-HA-肝ECM水凝胶进行包被,细胞接种至96孔板或48孔板中。CCK-8法检测培育第1、3、5、7天的吸光度值,Live/Dead细胞染色法查看相同时间点的细胞存活状况,保存数据及图像。4、所有数据使用SPSS 18.0软件包进行统计学分析。结果:1、HE及DAPI染色:大鼠肝脏经脱细胞加工后细胞脱除完全。2、下颌下腺细胞的培养及鉴定:原代培养的SD大鼠下颌下腺细胞,D5细胞呈多角形,边界清晰,排列呈鹅卵石样,D14细胞呈铺路石状。第2代下颌下腺细胞表达α-淀粉酶、CK7。3、细胞增殖:CCK-8检测显示实验组和对照组下颌下腺细胞在1-7天内的细胞增殖活性均先增加后降低。实验组在1-7天内的增殖活性高于对照组(P<0.05)。在第5天时,实验组的细胞增殖活性(1.10±0.0826)较对照组(0.83±0.1236)增高(P<0.05)。4、细胞存活:Live/Dead细胞染色法表明实验组和对照组下颌下腺细胞在1-7天内的死细胞比率均先升高后降低。实验组在1-7天内的死细胞比率低于对照组(P<0.05)。在第5、7天时,实验组死细胞比率较对照组降低(P<0.05)。结论:本研究成功制备了具有细胞相容性的HP-HA-肝ECM水凝胶支架材料,为三维构建组织工程化涎腺类器官的研究打下了基础。