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TRAIL由于可以选择性的诱导转化细胞、肿瘤细胞和病毒感染的细胞发生凋亡,但是对正常细胞没有明显的毒害作用,一直是肿瘤治疗中的研究的重点和热点。但是很多的肿瘤细胞对TRAIL容易产生耐受,可能的原因之一在于Caspase-8的表达量不高,使凋亡信号无法完整的传递下去。另外还有抗凋亡蛋白的存在,如c-FLIP、IAP、Bcl-2等,这些蛋白会阻碍凋亡信号的传导。若将凋亡信号传导的过程给阐释清楚,那么针对于这条凋亡信号通路上的治疗研究会提供很多帮助。通过氨基酸序列及蛋白三维晶体结构的分析,c-FLIP和Procaspase-8与FADD的作用位点可能是完全不同的。在亲和层析的实验中,体外筛选了 FADD的DED域的六个α-螺旋的实验结果也证实了这个推论。C-FLIPs(180aa)和Procaspase-8-DED利用原核表达系统来进行蛋白的表达,用于后续的亲和层析的实验上,进行FADD的6个α-螺旋的亲和力的筛选。经过筛选后表明Helix-4与c-FLIPs(180aa)具有较强的相互作用而Helix-5与Procaspase-8-DED具有较强的相互作用。在Helix-4中筛选出了两个小肽“Ser-Met-Leu-Leu-Glu-Gln”和“Met-Leu-Leu-Glu”是与c-FLIPs(180aa)有较强的亲和力的,而且这两个小肽还可以占据其与Helix-4的结合位点。我们可以确定c-FLIPs(180aa)是与FADD的DED域上的Met-Leu-Leu-Glu结合的。在Helix-5中筛选出了“SLRR”和Helix-6筛选了“LRRHD”这两个小肽是与Procasapse-8-DED有较强的亲和力的,而且这两个小肽还可以占据其与Helix-5的结合位点。我们可以确定Procasapse-8-DED是与FADD的DED域上的LRR结合的。在 Ser-Met-Leu-Leu-Glu-Gln 和 Met-Leu-Leu-Glu 的结构基础上,为 了获得与c-FLIPs(180aa)亲和力更高的结构,通过改变氨基酸的结构我们设计合成了12个小肽。在这12个小肽中D-Met-Leu-Leu-Glu-D-Ala是亲和力最高的小肽,而D-Leu-Leu-Glu是具有亲和力的最短的小肽。我们最终确定合成了Ac-D-Met-Leu-Leu-Glu-D-Ala-FMK,下一步用于肿瘤细胞实验中拮抗肿瘤抗凋亡调节因子c-FLIP。另外,在原核表达载体pET28a(+)质粒上构建了 Procaspase-8、c-FLIPs(F114A)、Procaspase-8-DED(△64L)和 FADD 重组质粒,用于后续的机制研究。