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背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，复发和转移是导致乳腺癌治疗失败的主要原因。研究显示肿瘤中存在着少量肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSC），CSC是肿瘤发生、转移和复发的根源之一。CSC受一系列信号转导通路的调控，Wnt/β-catenin通路是其中的一种。SATB1（special AT rich sequence bindingprotein，SATB1）是一种组织特异性表达的核基质结合蛋白，SATB1通过调控Wnt/β-catenin通路影响肿瘤发生、浸润、转移及复发。目的：采用RNAi抑制乳腺癌干细胞SATB1表达，观察乳腺癌干细胞wnt-1、β-catenin的变化，研究SATB1对乳腺癌干细胞Wnt/β-catenin通路研究的影响。方法：1根据GenBank提供的SATB1基因序列，利用siRNA的合成原则，合成4组含干扰SATB1序列并包装至慢病毒载体。2为对照需要及摸索感染条件，将不含干扰序列的空包病毒转染MCF-7细胞得MCF-7/siControl作为阴性对照。34组慢病毒载体分别转染MCF-7细胞，然后采用实时荧光定量PCR和Western blot，检测4组MCF-7细胞SATB1mRNA和蛋白，筛选出SATB1基因抑制效果最好的MCF-7细胞(MCF-7/siSATB1)。4根据乳腺癌干细胞的特异性免疫标记CD44+CD24-，通过流式细胞术分选出MCF-7干细胞、MCF-7/siControl干细胞和MCF-7/siSATB1干细胞。5实时荧光定量PCR检测上述三组乳腺癌干细胞wnt-1、β-catenin mRNA表达。结果：1成功构建4组人SATB1基因干扰的重组慢病毒：SATB1/GV115-RNAi#1、SATB1/GV115-RNAi#2、SATB1/GV115-RNAi#3、SATB1/GV115-RNAi#4，经包装产生的病毒滴度均大于1.0×108TU/ml。2空包病毒载体及上述4组SATB1基因干扰的重组慢病毒分别转染MCF-7细胞，2-3天后GFP荧光表达均＞70%，证实重组慢病毒转染MCF-7成功。MOI=20，添加完全ENi.S组的转染效率最高为94.85%。34种重组慢病毒感染的MCF-7细胞中，SATB1/GV115-RNAi#4组MCF-7细胞的SATB1mRNA相对表达量0.397±0.12，SATB1蛋白标化后的净光密度值为0.5332±0.027，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。SATB1/GV115-RNAi#4组MCF-7细胞的SATB1mRNA抑制率为60.3%，蛋白抑制率46.68%，符合RNA干扰要求（大于30%），将SATB1/GV115-RNAi#4MCF-7细胞作为MCF-7/siSATB1。4流式细胞仪检测MCF-7、MCF-7/siControl和MCF-7/siSATB1细胞标记CD44+CD24-的表达。结果：①MCF-7：3.05%；②MCF-7/siControl：2.62%；③MC F-7/siSATB1：0.79%。然后采用流式细胞分选术成功分选MCF-7、MCF-7/siControl和MCF-7/siSATB1干细胞，并提取mRNA。5实时荧光定量PCR检测MCF-7干细胞、 MCF-7/siControl干细胞和MCF-7/siSATB1干细胞的SATB1、 wnt-1、 β-catenin的表达，结果：①MCF-7/siSATB1干细胞SATB1基因mRNA相对表达量为0.164±0.17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MCF-7/siSATB1干细胞SATB1抑制率86.3%。②MCF-7/siSATB1干细胞wnt-1基因mRNA相对表达量为0.367±0.17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MCF-7/siSATB1干细胞wnt-1抑制率63.3%。③MCF-7/siSATB1干细胞β-catenin基因mRNA相对表达量为0.307±0.17，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSS17.0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MCF-7/siSATB1干细胞β-catenin抑制率69.3%。结果显示MCF-7/siSATB1组干细胞的SATB1、wnt-1、β-catenin的mRNA表达降低。结论：RNAi抑制乳腺癌干细胞SATB1表达，可以影响乳腺癌干细胞Wnt通路中wnt-1、β-catenin的mRNA表达。