棘胸蛙腐皮病病原分离鉴定与流行病学调查

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棘胸蛙(Rana spinosa),又名石蛙、田鸡、石蛤等,是我国棘蛙属中分布最广的物种之一。人工养殖棘胸蛙已经成为这一自然资源规范利用的有效途径,病害问题严重制约了棘胸蛙产业的健康发展。本论文以湖南、江西两省典型养殖场为样本,系统开展了棘胸蛙腐皮病流行病学调查、病原鉴定及防治药物筛选工作,主要研究结果如下:1.棘胸蛙腐皮病病原分离鉴定2019年从常德市、浏阳市8家棘胸蛙养殖企业收集到患腐皮病成蛙共24只,进行了寄生虫和病毒检查,排除了这两类病原侵染的可能,从病蛙皮肤病灶和肌肉组织、肝脏中分离出了41份优势生长菌样本,对所有样本进行16Sr DNA序列的分子鉴定,将测序结果与Gen Bank中进行比对,对比结果相似度均在99%以上,登录号依次为MG428957.1;CP026046.1;JF119800.1;MG421009.1;MF185211.1;MK940238.1;MN582981.1;MG208859.1;KM349412.1;CP020507.1;MG737577.1,并构建系统发育树,结合16Sr DNA序列测定与系统发育结果分析,以上面的登录号为顺序,分别为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)20份,摩氏摩根菌(Morganella Morganii)5份,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)4份,拜氏不动杆菌(Acinetobacter beijerinckii)、琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)、类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)、弗氏柠檬酸杆菌(citrobacter freundii)各2份,鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)各1份,人工复感染中,嗜水气单胞菌攻毒组还原了腐皮症状,皮肤病灶特征、内脏病变特征与自然发病症状一致,说明嗜水气单胞菌是棘胸蛙腐皮病的主要病原。病灶周围的真皮层组织出现炎症化脓,炎症反应的持续恶化可能导致了病灶特征变化与棘胸蛙的死亡,药物敏感实验结果表明嗜水气单胞菌与摩氏摩根菌对庆大霉素高度敏感,其它种类菌株表现出不同的药物敏感特性。2.棘胸蛙腐皮病流行病学调查通过对湖南省江西省共29家养殖企业的实地调查与线上参与函调的31家养殖企业中发现:棘胸蛙腐皮病在蝌蚪期、变态期、幼成蛙阶段均有出现,蝌蚪期腐皮病以烂尾为主要表现症状,发生几率为5%左右,致死率在90%以上。变态期腐皮病以综合症状的形式呈现,存在皮肤病灶特征的死亡变态蛙比例较低,致死率在90%以上。幼蛙期腐皮病的症状表现与成蛙腐皮病症状趋近一致,初期表现为皮肤白点,后期创口面积不断扩大,深达肌肉组织,幼蛙期的腐皮病发生几率较成蛙低,但致死率较成蛙高。成蛙腐皮病的发病率约占成蛙养殖总数的30%,致死率因治疗手段的差异在10%-20%之间,整个发病过程会持续近30天。腐皮病每年3—9月份为流行期,4、5、6月份为腐皮病流行高峰期。在影响腐皮病的因素调查中发现养殖密度越高、卫生清洁频率越低,腐皮病发病几率就越高。3.养殖场的设计与管理建议。通过考察与评估以保证水源稳定性、避免受干旱洪涝泥石流灾害的影响;以提高养殖池蓄水水位和喷雾供水的方式应对水源短缺问题;采用U型沟渠式养殖池以提高卫生管理效率;石菖蒲搭配石蛙养殖、减少池面和养殖材料的棱角突刺对降低腐皮病发病率有一定帮助;养殖池卫生管理应减少对蛙体的应激;巡查过程中及时隔离处理发病蛙;增加饵料多样性,合理用药,保证养殖安全。
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