体细胞核移植技术对于动物育种、地方优良资源保存、濒危动物保护以及发育生物学基础理论研究等均具有重要意义,但目前体细胞核移植成功率较低,已成为制约这一技术应用的主要障碍,因此完善体细胞核移植技术体系,探明核移植技术机理乃是当前急需解决的难题。本研究采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂——Scriptaid处理绵羊核移植供体细胞以及核移植胚胎以提高其组蛋白乙酰化水平,探讨了组蛋白乙酰化水平的提高对绵羊体细胞核移植胚胎体外发育的影响。另外,对咖啡因在核移植胚胎体外发育过程中的作用也进行了研究。为了提高绵羊体细胞核移植效率,以绵羊卵丘细胞为核供体,在融合后的核质互作期间加入咖啡因,结果表明,咖啡因浓度以2.5mmol/L或5mmol/L为宜。虽然卵裂率、桑椹胚率以及囊胚发育率与对照组差异不显著(P>0.05),但囊胚细胞数显著高于对照组(P<0.05)。采用不同浓度Scriptaid处理绵羊卵丘细胞,结果表明,以0.2μmol/L Scriptaid处理组核移植胚胎囊胚发育率最高,达24.39%,显著高于对照组和0.8μmol/L处理组(P<0.05)。在对胚胎体外培养的过程中加入Scriptaid,结果显示仍以0.2μmol/L处理组囊胚发育率最高,达24.31%,显著高于对照组和0.8μmol/L处理组(P<0.05)。尽管采用0.2μmol/L Scriptaid分别处理绵羊供体卵丘细胞和核移植胚胎时,囊胚发育率显著提高(P<0.05),但采用0.2μmol/L Scriptaid同时处理供体卵丘细胞和核移植胚胎时的囊胚发育率反而明显降低,但与前两者不显著(P>0.05),这很可能与Scriptaid对细胞有一定的毒性。在激活后对胚胎进行培养的过程中,用0.2μmol/L Scriptaid对核移植胚胎进行不同时间的处理后发现,处理24h和48h对核移植胚胎的囊胚率分别为24.94%和24.27%,显著高于对照组和96h处理组(P<0.05),但是24h和48h处理组之间差异不显著(P>0.05)。在绵羊核移植胚胎体外培养时加入0.2μmol/L Scriptaid,35天妊娠率显著高于对照组(P<0.05)。对0.2μmol/L Scriptaid处理绵羊卵丘细胞获得的不同发育时期核移植胚胎进行免疫荧光染色,结果表明,1-细胞至8-细胞期的胚胎中H4K12乙酰化水平显著高于对照组,但囊胚中H4K12乙酰化水平差异不显著;并且试验组和对照组囊胚内细胞团和滋养层细胞间H4K12乙酰化水平差异均不显著(P>0.05)。综上所述,2.5mmol/L或5mmol/L咖啡因处理绵羊核移植胚胎可显著提高囊胚细胞数。采用0.2μmol/L Scriptaid分别处理绵羊供体细胞或胚胎时,均可显著提高核移植胚胎囊胚发育率;并且试验组1-细胞、2-细胞、4-细胞和8-细胞核移植胚胎H4K12乙酰化水平显著高于对照组。可见,核移植胚胎组蛋白乙酰化水平的提高有利于提高其体外发育效率。