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泡沫病毒(Foamy virus,FV)是逆转录病毒科(Retroviridae)的一员,大部分哺乳动物均已被证实是其宿主,如黑猩猩、猫、牛、马、羊以及人。不同于同属逆转录病毒科的艾滋病病毒(HIV)和人T细胞白血病病毒(HTLV),泡沫病毒虽然在感染宿主后建立的是终生持续感染,却并无病理损伤表现,而这种潜伏性感染的机制至今并不明确。近年来对新型病毒载体的需求和新的人畜共患动物病毒传染病的不断出现,促进了国内外众多学者对泡沫病毒的潜伏性感染机制的研究,特别是泡沫病毒作用宿主免疫系统细胞因子的探究。鸟肌腱膜纤维瘤癌基因人源同系物c-maf编码的c-Maf蛋白,是Maf家族的代表一员。最新研究表明c-Maf可以下调HTLV的Tax蛋白活性,在HTLV持续性感染T细胞中起到重要作用;也发现c-Maf能协同细胞因子NFAT2及NFκB p65使HIV的LTR启动子转录活性上调。FV与HTLV、HIV同属逆转录病毒,它们在转录调控方面有很多相似之处,据此推测c-Maf在FV转录调控过程中也可能具有重要作用。此外c-Maf对白介素IL-4、IL-10、IL-21等表达有激活作用,能促使骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、趋化因子单核细胞炎性蛋白的受体(CCR1)、周期蛋白D2(CyclinD2)、整合素(Integrin)和AMP激活蛋白酶5(ARK5)的过度表达,引起T细胞的恶性转化。这些表明c-Maf参与了肿瘤形成和免疫细胞分化,对于免疫系统而言至关重要。本研究采用分子生物学手段,探究了泡沫病毒对c-Maf表达的影响,对其作用机制展开了研究,逐步揭示泡沫病毒潜伏性感染过程中对宿主免疫系统细胞因子的作用,为后续其无病理损伤表现的持续性感染机制的深层次研究提供基础。本研究取得结果如下:1.收集泡沫病毒感染及病毒Tas蛋白表达载体转染的细胞样品,基因芯片检测后对结果进行验证,结果显示泡沫病毒能上调c-Maf基因的转录表达,且病毒蛋白Tas也能提高c-Maf基因的转录水平。2.通过生物信息学技术查找到c-Maf全基因序列信息。利用在线软件分析c-Maf的启动子区域,在其启动子区序列发现细胞因子CRE、STAT3、C/EBP、SRE、SRF的作用位点。通过Clustalw2将相关序列与泡沫病毒LTR、IP启动子及Kip2基因的Tas结合位点比对,在c-Maf启动子上发现了 Tas结合位点。3.泡沫病毒感染HT1080细胞,从感染12小时开始,每隔12小时收集样品,检测c-Maf基因的转录水平,发现病毒感染细胞24小时后c-Maf转录水平开始提高,并在48小时后出现显著性上调,说明了泡沫病毒持续作用下可以使c-Maf表达量上调。4.泡沫病毒五个蛋白的重组表达载体转染HT1080细胞,在转染24小时和48小时后收集样品,检测c-Maf基因表达水平,发现转染24小时及48小时后,Tas蛋白表达载体转染细胞的c-Maf转录水平均高于其他蛋白表达载体处理组,表明上调c-Maf表达水平的泡沫病毒蛋白为Tas,其他蛋白对c-Maf表达水平没有影响。5.从HT1080细胞中提取基因组,扩增得到包含c-Maf启动子区的1348 bp序列,通过酶切插入报告载体构建了 c-Maf启动子区报告基因表达载体pGL3-Basic-cMAF和pGL3-Basic-TRE.del,通过菌液PCR和测序比对,确定重组报告基因载体构建成功。6.将构建好的 pGL3-Basic-cMAF 和 pGL3-Basic-TRE.del,分别与 Tas 真核表达载体pCI-Tas共转染细胞,收集样品分析荧光素酶相对活性,发现c-Maf启动子具有较高的活性,但缺失Tas结合位点后,启动子活性下调,表明泡沫病毒是通过Tas蛋白直接调控细胞因子c-Maf的表达。以上结果表明泡沫病毒是通过Tas蛋白直接作用细胞因子c-Maf,使其表达上调,阐明了泡沫病毒对c-Maf的作用机制,为后续其潜伏性感染机制的深层次研究提供基础。