【摘 要】
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目的:血流感染是导致全球住院患者高发病率和病死率的主要原因。凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negative Staphylococci,CNS)在院内血流感染中发挥重要的作用。在CNS中,溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus,SH)在血流感染中分离率位居第二(仅次于表皮葡萄球菌),且具有最高水平的抗生素耐药性,大多数发展为多重耐药菌株。近几十年来,随着抗菌
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目的:血流感染是导致全球住院患者高发病率和病死率的主要原因。凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negative Staphylococci,CNS)在院内血流感染中发挥重要的作用。在CNS中,溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus,SH)在血流感染中分离率位居第二(仅次于表皮葡萄球菌),且具有最高水平的抗生素耐药性,大多数发展为多重耐药菌株。近几十年来,随着抗菌药物的广泛应用,耐甲氧西林SH(Methicillin-resistance Staphylococcus haemolyticus,MRSH)的检出率不断增加,并且传播、流行、进化的速度增快,给人类健康带来了巨大的威胁。本研究的目的是分析本地区临床血流感染患者中分离的MRSH的药物敏感性、葡萄球菌盒染色体mec(staphylococcal chromosome cassette mec,SCCmec)分型及菌株间的克隆关系,为临床提供诊断与治疗的依据。方法:收集2013年1月1日-2014年12月31日湖南省20家三甲医院血流感染患者的MRSH 78株,使用MALDI-TOF MS对分离株进行鉴定,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验;CLSI推荐的D试验方法检测红霉素对克林霉素的诱导耐药表型;PCR扩增耐药基因及SCCmec基因,阳性结果用Sanger测序方法进行验证;脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)检测MRSH的同源性。结果:药敏结果显示,78株MRSH对苯唑西林、头孢西丁、青霉素耐药率为100%,对红霉素、左氧氟沙星、庆大霉素和克林霉素的耐药率分别为94.9%、80.7%、75.6%和53.8%,2株对利奈唑胺耐药,1株对替考拉宁耐药,没有菌株对万古霉素耐药。红霉素对克林霉素的诱导耐药表型检测结果显示20.6%(7/34)为诱导型耐药(inducible macrolidelincosamide-streptogramin,i MLS)表型。耐药基因结果显示,大多数耐甲氧西林的菌株携带mec A基因(94.8%,74/78),耐青霉素的菌株携带bla Z基因(94.8%,74/78);以tet K基因为主要遗传决定因素的分离株中,90.9%(20/22)对四环素耐药;34.6%(27/78)的复方新诺明耐药株中,88.9%(24/27)携带dfr G基因;2株利奈唑胺均携带cfr A基因;而仅在65.1%(41/63)的耐左氧氟沙星的菌株中发现gry A基因;94.9%(74/78)的红霉素耐药的菌株中,erm C、msr A基因为主要的遗传决定因素,分别占41.9%(31/74)、39.1%(29/74);75.6%(59/78)的庆大霉素耐药的菌株中,以aph(3′)-Ⅲ基因为主要的遗传决定因素,占35.6%(21/59)。SCCmec分型结果显示可分型为50%(39/78),不可分型为50%(39/78);39株可分型菌株中,单个SCCmec类型以Ⅰ型为主(13/36,46.2%),混合型SCCmec类型以Ⅰ+Ⅱ型为主(12/39,30.8%)。PFGE结果显示,PFGE带型整体较为分散,但有6组菌株间存在100%同源性。结论:本地区血流感染中MRSH的耐药形势严峻,对β-内酰胺类抗生素高度耐药,尤其是对青霉素耐药率为100%;对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、庆大霉素也有较高耐药率。D-试验阳性率为20.6%(7/34),提示有利于临床合理应用MLS类(大环内脂类、林可酰胺类、链阳菌素类)抗生素。血流感染分离的MRSH菌株的耐药性与耐药基因相关,且耐药菌株同时携带多种耐药基因,其中erm C、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′,4″)、tet K、gry A基因分别是引起大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类抗菌药物耐药的主要基因。在SCCmec可分型的菌株中,以Ⅰ型SCCmec为主,SCCmec多样且不同SCCmec型别之间的耐药性存在差异。本地区MRSH以散发为主,但存在院间及院内交叉感染的可能性,应加强对其监测,减少MRSH的进一步传播。
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