由于生物农药克服了传统化学农药易污染环境,对人畜有害及易使病原菌产生抗药性的缺点,近年来已广泛应用于农业生产实践。但是活菌制剂由于受环境稳定性和货架期的影响,其发展和应用受到较大的限制。微生物源代谢产物显然在剂型制备和药效稳定性上具有更明显的优势。随着共培养技术的兴起,利用两种或两种以上的微生物之间的协同代谢或诱导作用来挖掘新型的抗菌物质已经受到越来越广泛的关注。本课题将侧孢短芽孢杆菌BL-21（Brevibacillus laterosporus BL-21）和枯草芽孢杆菌HNDF2（Bacillus subtilis HNDF2）进行共培养,对共培养液的稳定性、抗菌谱及抗菌机理进行分析,并在此基础上,通过各种分离技术和质谱分析,对纯培养液与共培养液中抗菌蛋白进行纯化及对比分析,以期为深入研究共培养液中抗菌物质的结构特性和实际应用奠定基础。通过菌株传代次数对共培养液抗菌活性的影响的研究,发现枯草芽孢杆菌HNDF2在F1代到F5代过程中,产生抗菌物质的活性较稳定,而侧孢短芽孢杆菌BL-21在F1代到F5代产抗过程中,F2代活性较好,同时在共培养过程中F2代抗菌活性最强。对共培养液稳定性的研究结果表明:共培养液对紫外光线及日光不敏感,抗菌活性较稳定;共培养液具有一定的热稳定性,在40℃到60℃条件下,活性较稳定,在80℃时,随着处理时间的延长,可观察到抗菌活性呈现下降趋势,处理30min后,活性下降22.6%。共培养液经过甲醇和乙醇处理后,抗菌活性损失较小,说明该物质对有机溶剂有一定的耐受性。共培养液抗菌谱的测定结果表明,共培养液对供试的十种植物病原真菌均有不同程度的抑制生长作用,其中对禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）和马铃薯早疫病菌（Alternaria alternata）抑制效果最明显。体外抗菌活性检测结果证明共培养液能显著抑制病原真菌孢子的萌发率,抑制效果可达43.5%。共培养液效价值为49.2AU/m L时,对病原真菌菌落的扩展的抑制效果达到最佳,抑制率为64%。当共培养液效价值为21.4 AU/m L时,对病原真菌菌丝体干重的抑制效果最明显,抑制效果可达77.8%。共培养液对菌丝体细胞透性具有显著的影响,菌丝体外液电导率值随着共培养液效价值的增加而变大。通过对纯培养液与共培养液中抗菌蛋白的初步对比分析可知,在相同的发酵条件下,侧孢短芽孢杆菌BL-21发酵液蛋白含量最高,枯草芽孢杆菌HNDF2蛋白含量较低,而共培养的蛋白含量为2495μg/m L,介于二者之间。通过SDS-page对比分析可知枯草芽孢杆菌HNDF2纯培养液的蛋白条带较少,侧孢短芽孢杆菌BL-21纯培养液和共培养液蛋白条带较为相似,但又有不同之处。通过对硫酸铵盐析分级后纯培养液与共培养液中抗菌蛋白的对比分析可知,在40%-50%硫酸铵沉淀级时,共培养液在170KDa和10KDa处存在明显的差异条带。在50%-60%硫酸铵沉淀级时,共培养液在55KDa处存在独有条带。在60%-70%硫酸铵沉淀级时,共培养液与纯培养液在60KDa与15KDa处虽然均存在条带,但纯培养液在此处的条带蛋白丰度显著高于共培养液,另外,纯培养液在37KDa处存在独有条带。将纯培养液与共培养液3KDa以下的抗菌蛋白经CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析、Sephadex G-25凝胶过滤层析、高效液相色谱进行分离纯化后,利用质谱分析技术鉴定蛋白结果可知,在BL-21纯培养液中存在的具有抗菌活性的蛋白可能为蛋白酶M23,而在共培养液中分离鉴定出聚酮合酶和新环脂肽抗生素罗克霉素。说明共培养液和纯培养液中的小分子抗菌物质也存在显著不同。