藏猪(Sus scrofa，Tibetan swine)主要产于我国西藏、四川西部、云南西北部以及甘肃南部的农区和半农半牧区，是世界上分布在海拔最高地区(2500～4300m)的稀有放牧猪种之一。藏猪具有抗逆性强、肌肉纤维细、肌间脂肪含量高和肉质风味好等优点；但同时存在产仔数低、生长缓慢和胴体瘦肉率低等不足。由于藏猪的生产性能低下，为了提高其生产性能，因而长期以来引进其他猪种与之进行杂交，导致其数量急剧减少，若不采取有效的措施，藏猪也会和许多其他地方猪种一样濒临灭绝，其所携带的优良基因，在我们还没有认识其价值以前就永远从基因库中消失。因此，有针对性开展藏猪遗传特性方面的研究，对猪种资源的保护和开发利用具有重大的价值，对今后的新品种培育和品种复壮、实现养猪生产的可持续发展具有十分重要的战略意义。由于藏猪分布在偏远高海拔山区和处于放牧的半野生状态，因此采样和测定研究工作难度大，目前国内外对这一宝贵的猪种资源的研究很少，并且主要是集中在生长发育性能和血液蛋白多态性研究方面，有关藏猪抗病力、肌肉品质和产仔数等特色性状基因方面的研究尚属空白。天然抗性巨嗜细胞蛋白基因(natural resistance associated-macrophage protein 1，NRAMP1)、心脏脂肪酸结合蛋白基因(heart fatty acid binding protein，H-FABP)和雌激素受体基因(estrogen receptor，ESR)是与抗病力、肌肉品质和产仔数相关的侯选基因，藏猪的这3个基因尚未有人研究。因此，本论文选择藏猪的NRAMP1、H-FABP和ESR基因进行研究，以发掘藏猪的优势特色，为藏猪资源的保护和开发利用奠定基础。首先，我们克隆了藏猪NRAMP1基因。从脾脏和血液白细胞样品制备RNA后，用RT-PCR的方法克隆了藏猪NRAMP1基因，序列分析发现其开放阅读框长度为1614bp，编码538个氨基酸残基，其蛋白质分子量为58．8kD，等电点为8．01，疏水氨基酸占52．8％，亲水氨基酸占31．4％，碱性氨基酸占5．8％，酸性氨基酸占5．4％，该蛋白质不含信号肽序列。预测的藏猪NRAMP1蛋白质具有其他物种保守的所有结构区域，包括1个富含脯氨酸和精氨酸的SH3结合域(SH3-binding domain)，4个PKC磷酸化位点(S／T-X-R／K)，2个N型糖基化位点(N-X-S／T)，1个转运功能区(transport motif)和12个转膜区域(transmembrane，TM)。将藏猪的NRAMP1cDNA序列与家猪相应序列比较，有13个位点发生了突变，其同源性达99．2％，但编码的氨基酸序列完全相同。藏猪与狗、绵羊、牛、鹿、马、人和鼠的NRAMP1cDNA之间的同源性分别为91．2％、88．7％、88．1％、86．8％、85．8％、83．2％和71．6％。其次，采用半定量和定量PCR方法，对藏猪的10种组织中NRAMP1基因的表达模式和表达水平进行研究。结果表明，该基因在藏猪的10个组织以及白细胞中均获得表达，不存在组织表达特异性。该基因在藏猪中表达比西方家猪更加广泛，说明NRAMP1基因在不同的品种间可能存在差异。定量和半定量PCR结果进一步证实了NRAMP1基因在藏猪中没有组织表达特异性。该基因表达拷贝数平均为3233拷贝／μL cDNA，但各组织间表达丰度存在极大差异，表达量最高为脾脏，最低为肝脏，两者相差77倍以上。各组织表达丰度从高到低的顺序是脾脏、大脑、肺、回肠、肾脏、淋巴结、结肠、心脏、肌肉和肝脏。上述测试结果为藏猪较其他猪种具有更强的抵抗力提供了间接证据。再其次，采用PCR-RFLP技术(限制内切酶采用MspⅠ、HaeⅢ和HinfⅠ酶)检测了96头藏猪在H-FABP基因位点的遗传变异。结果表明：藏猪H-FABP基因在HinfⅠ和MspⅠ酶切位点均具有多态性，分别表现为HH、Hh、hh和AA、Aa和aa基因型，其中，H和A等位基因的频率分别为0．521和0．406；在HaeⅢ位点无变异，均表现为DD型。最后，采用PCR-RFLP技术检测了96头藏猪在ESR基因位点的遗传变异，并分析了不同基因型对产仔数的影响。结果表明：在藏猪中只有AA和AB 2种基因型，没有高产仔的优势基因型BB，其中，AA和AB基因型分布频率分别为0．75和0．25，A、B等位基因的频率分别为0．875和0．125，研究结果较好地解释了藏猪产仔数不高的现象。藏猪不同ESR基因型产仔数和产活仔数之间存在明显差异，其中AB基因型的产仔数较AA型高2．03头。这些发现对藏猪的产仔数性状的改进具有重要意义。对藏猪最具特色的3个性状相关基因进行的初步研究和所获得结果，为认识、保护和利用藏猪的优良基因资源奠定了基础。