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虎杖为蓼科植物虎杖 Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根茎及根,是我国传统中药,为《中国药典》收载品种。虎杖的化学成分主要有芪类(二苯乙烯类)和蒽醌类化合物。近年来芪类化合物尤其是白藜芦醇被广泛关注,据报道,白藜芦醇具有抗氧化、抑菌、抗癌、抑制血小板聚集等活性,因而具有很高的保健、药用价值。因此,虎杖中白藜芦醇的提取、纯化工艺成为人们研究的热点。但目前由于提取方法的局限,提取率较低,造成资源的浪费。本实验以简化工艺、降低成本、提高原料利用率为前提,对虎杖中白藜芦醇的提取、分离纯化进行系统、深入的研究。此外,建立了虎杖提取物的含量测定方法,初步研究虎杖提取物体外活性与HPLC图谱的相关性。具体内容摘要如下: 1.本课题对虎杖中白藜芦醇粗提物的提取工艺及其纯化进行了研究。研究过程中采用单因素试验和正交试验相结合的方法对其进行了系统研究。虎杖中白藜芦醇粗提物最佳提取工艺为:纤维素酶用量为20 mg.g-1,加水量3倍,浸泡时间6天,提取溶剂为二氯甲烷,10倍用量,水浴回流温度70℃,回流提取2次(第一次2 h,第二次1 h)。虎杖粗提取物用30%乙醇溶解后,选用石油醚-二氯甲烷(2:1)进行反复萃取(4次),所得浸膏中白藜芦醇含量达60%以上,得膏率为1.9%。 2.采用RP-HPLC测定不同工艺条件下提取物中白藜芦醇,大黄素和大黄素甲醚的含量,选用Agilent SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以甲醇-水为流动相梯度洗脱,流速1 mL.min-1,检测波长303 nm,柱温30℃。该含量测定方法分离效果好,简便准确,可用于虎杖提取物的含量测定。 3.将虎杖醇提物进行萃取处理,利用建立色谱方法采集不同萃取部分的指纹图谱,并对不同萃取部分作体外抗菌、抗肿瘤活性筛选,采用灰度关联法对提取物的指纹图谱特征峰所代表的化学成分与体外活性进行分析,探讨二者的相关性。