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益生菌在促进人体健康和防止疾病中发挥着重要的作用,是未来功能食品发展的重要领域。本课题采用体外和体内实验,测定了益生菌及联合菌株的潜在功能,筛选共生性较好的菌株。 本试验共测定9株潜在益生菌,其中PB1和A878为嗜酸乳杆菌;Inf和Pba为双歧杆菌;M1、PB2、A30、A31为链球菌;M2为枯草芽孢杆菌。分离出一株酪酸梭菌。大肠杆菌、痢疾杆菌、沙门氏菌购于黑龙江省临床检测中心。 采用比浊法测定潜在益生菌的生长曲线,结果表明,本实验所测定的9株菌中,产酸能力最强的是PB1和A878、Pba和Inf,其次为PB2、M1、A30、A31、M2。但是其中四株链球菌生长速度较快,没有明显的迟滞期。确定各菌株对数生长期末期分别为:PB1和A878:12h;Inf和Pba:24h;PB2、M1、A30、A31、M2:8-10h。 采用牛津杯法测定八种潜在益生菌对大肠杆菌、痢疾杆菌、沙门氏菌的抑制性,结果表明,嗜酸乳杆菌PB1、A878和双歧杆菌Pba、Inf具有较强的抑菌能力,对三种致病菌能够形成明显的抑菌圈,而且对三种致病菌的抑菌能力明显不同。其抑菌机理主要是分解糖类产生酸类物质发挥主要作用。 将PB1和A878分别与M1、PB2、A30、A31以1:1的比例混合发酵后,测定联合菌株对致病菌的抑制性,结果表明PB1与各球菌联合后,可以互利生长,其中复合较好的为PB1与M1和A30。而A878与各球菌混合发酵后,抑菌性降低。在PB1与各球菌混合培养的基础上,再和Inf和Pba混合培养,结果发酵液中Inf和Pba的生长受到限制,结果表明,在体外Pba和Inf很难与需氧菌共生。 将几株体外性状好的菌株Pba、PB1、M1、PB1+M1、PB1+A30,每天以0.5ml/每只发酵液的量灌胃给正常小白鼠,时间30天,测定小鼠免疫器官指数和血清中细胞因子的变化,并观察小鼠脾脏的变化。结果表明,PB1+A30、PB1、PB1+M1、Pba对脾脏的发育刺激最为明显(P<0.01),脾脏指数分别提高了23.4%、29%、36.6%、23.6%。Pba、PB1、A30与PB1+M1与对照组相比可以明显提高小鼠血清中IL-2的含量(P<0.05)。Pba、PB1与对照组相比,能显著增加IL-6的含量(P<0.01)。所选菌株均能不同程度的提高实验小鼠血清中TNF-α的含量(P<0.01),菌株之间差异不显著。PB1+M1、PB1+A30诱导生成TNF-α的量最多,分别为1.17ng/mL和1.14ng/mL。由此可见,所选益生菌菌株能够增强小鼠的免疫功能。 将PB1、A878分别和各球菌M1、PB2、A30、A31接种于高胆固醇培养基中,在有胆汁和厌氧条件下,37℃混合培养16-18h,测定复合菌株和单菌株降低胆固醇的效果,以未接菌培养基为对照,结果表明,PB1与M1及PB2;A878与A30及A31的协同作用较好,降培养基中胆固醇的量都高于40%以上。单菌株降胆固醇效果最好的是PB1、A878、A30、A31。