目的:检测Asporin在结直肠癌组织和癌旁组织中m RNA和蛋白的表达水平,分析其表达情况与患者临床病理资料之间的联系。进一步过表达和干扰结直肠癌细胞中的Asporin表达水平后通过一系列生物功能实验了解Asporin对结直肠癌细胞侵袭、转移能力的影响,并建立体内动物模型。最后,我们通过Western-blotting技术了解Asporin在结直肠癌中影响肿瘤转移的的作用机制。方法:应用RT-PCR、免疫组化技术技术检测200例结直肠癌患者术后标本中癌组织、癌旁组织中Asporin的表达情况,并分析标本中Asporin的表达与患者的临床指标之间的关系。应用Western-blotting技术检测Asporin在8株结直肠癌细胞HT-29、Lo Vo、Caco2、HCT116、SW1116、SW480、RKO、SW620中的表达情况,并用细胞免疫组化法验证Western-blotting的结果。构建Asporin过表达慢病毒载体,对于低表达的细胞HT-29和Lo Vo转染慢病毒后经嘌呤霉素(Puro)筛选获得稳转过表达细胞株。采用细胞划痕实验、Transwell实验、小管形成实验检测Asporin上调后HT-29和Lo Vo细胞的愈合、侵袭、迁移及小管形成能力。Western-blotting检测HT-29、Lo Vo细胞中Asporin上调后Src信号通路蛋白及VEGF蛋白的表达水平变化,同时在组织标本上检测Asporin和P-cortactin(Tyr421)的共表达情况。将HT-29/Asporin、HT-29/Vector细胞注射裸鼠皮下成瘤,取出瘤体免疫组化、Western-blotting检测VEGF的表达情况。裸鼠门静脉注射法构建肠癌肝转移动物模型,检测Asporin上调后的肠癌细胞HT-29的肝转移能力。将Asporin在RKO和SW620细胞中经sh RNA干扰后行上述系列生物功能实验和分子机制研究。结果:Asporin基因在结直肠癌组织中的m RNA和蛋白水平上的表达相比于癌旁组织明显增高(P<0.0001),Asporin的过表达与结直肠癌的TNM分期和淋巴结转移情况相关。划痕实验、Transwell实验、小管形成实验显示Asporin增加结直肠癌细胞的愈合、侵袭、迁移、小管形成能力。在裸鼠动物模型中,Asporin增加癌组织中VEGF的表达,促进结直肠癌细胞肝转移(P<0.01)。另外,我们发现Asporin可导致EGFR、Src的磷酸化,并进一步引起Cortactin Tyr421位点的磷酸化。结论:Asporin在结直肠癌组织中呈高表达,其表达水平与患者的TNM分期及淋巴转移情况相关;Asporin通过EGFR/Src/Cortactin信号通路促进结直肠癌细胞的侵袭、转移。