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内生菌是指在植物体内聚集对植物不产生危害的微生物。由于内生菌存在于植物体内,所以容易占据有利的生防位置,能够耐受植物自身防卫反应,可以和病菌直接作用,提供给植物全面有效的保护,具有良好的生防应用前景。内生菌在与植物的长期共生中,形成了独特的生理特点和代谢活性,是一个有价值的微生物资源库。 本论文进行了从蔬菜中分离获得放线菌的研究。首先对两种表面消毒剂和两种表面消毒检验方法进行了比较和选择,确定了使用0.1%升汞处理15min或者20%次氯酸钠处理5min,辅之以改良的表面消毒检验,可以保证获得的是植物内部微生物。对芹菜、油菜、辣椒、茄子、大豆、小白菜用常规方法进行了内生微生物的分离,发现目前的内生放线菌分离方法对蔬菜内生放线菌的分离不很有效,因此从前处理和分离培养基两个方面对蔬菜内生放线菌的分离方法进行了改进,并取得了比较好的效果。 对实验中分离得到的部分菌株进行了拮抗3种植物病原菌的体外活性筛选,发现20个活性菌株包括8株放线菌对植物病原菌具有拮抗活性,说明内生菌具有生防潜力。8.4%的测试菌具有活性,相比23.5%的测试放线菌具有活性,证明放线菌是活性菌株的主要来源。选择了一株抗立枯丝核菌活性最强的放线菌CHSH19A进行较为深入的研究。发现CHSH19A的拮抗机制是产生水溶性的抗生物质,活性物质的热稳定性和pH稳定性很好,活性物质的产生受培养基组成的影响。这些研究加深对内生菌抗病机制的认识,为今后生防内生菌的开发提供有力的支持。 根据当前微生物资源开发中的“一菌多筛”路线,对CHSH19A的其它生物活性进行了研究。该菌株对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白假丝酵母、黑曲霉有拮抗活性,对人的肿瘤细胞QGY-7701和Raji有一定细胞毒性,其中对Raji细胞的ID50达到1000。这些活性受培养时间和培养基成分的影响。 在CHSH19A显示出多种生物活性基础上,为了今后基因改造和代谢调控的蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探需要,对该菌株165招时A的大部分序列(1382bp)进行了测序,得到了该菌株的分子信息,证明该菌株属于链霉菌S幼,to朔少c曰sP.。