棉花黄萎病(cotton verticillium wilt)主要是由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)侵染引起的,是一种严重危害棉花生产的世界性土传真菌病害。该病菌可以在土壤中存活多年,成为翌年棉花病害的重要侵染源。因此,快速及时地检测出棉花黄萎病菌,对棉花黄萎病的早期监控预警及后期防治具有重要意义。土壤是棉花黄萎病菌生存的主要场所,但是由于土壤中存在着种类繁多且不计其数的微生物,从土壤中直接分离得到病原菌十分困难;另一方面,由于土壤中腐植物质等抑制因子的存在,直接从土壤中提取病原菌DNA也比较困难。本研究改进了土壤中棉花黄萎病菌的DNA提取方法,并运用巢氏PCR技术,建立了土壤中棉花黄萎病菌的快速分子检测体系,具有高度的特异性和灵敏性,为建立基于微流控PCR技术的棉花黄萎病的快速检测技术奠定基础。论文主要研究结果如下:1、设计了棉花黄萎病菌的特异性引物VDS-F/VDS-R,通过反应条件优化,建立了棉花黄萎病菌的常规PCR检测体系,特异性扩增产物大小约520 bp,检测灵敏度达到10 pg级。该体系检测特异性强,可以准确检测棉花黄萎病菌的三种不同菌株VD、V991、V250,还可以特异性地从含有棉花黄萎病菌的土壤及棉花植株组织中检测到病原菌。2、分析比较了5种土壤基因组的提取方法,建立了液氮研磨-试剂盒方法提取土壤棉花黄萎病菌DNA的标准程序。利用此方法提取的土壤棉花黄萎病菌基因组DNA质量较高,可以满足后续PCR扩增的要求。3、建立了土壤中检测棉花黄萎病菌的巢氏PCR检测技术。巢氏PCR第一轮引物为ITS1/ITS4,第二轮引物为VDS-F/VDS-R。利用改进的土壤提取方法提取带菌土壤的总DNA,该巢氏PCR检测体系可以准确地检测出土壤中的棉花黄萎病菌,检测的灵敏度达到10个孢子/克土。本研究建立的土壤中棉花黄萎病菌的巢氏PCR检测方法可为生产应用中棉花黄萎病的病害风险评估提供技术支持。同时,该方法的建立,为基于微流控PCR技术的棉花黄萎病菌快速检测奠定了基础,也为土壤中其它病原菌的检测提供了参考和依据。