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目的:观察银杏内酯B预处理和后处理对缺血-再灌注损伤的离体大鼠心脏和单个心肌细胞收缩功能的影响。以心功能、心肌梗死面积、酶学、单个心肌细胞的收缩功能以及凋亡蛋白、抗凋亡蛋白表达为指标,研究银杏内酯B预处理后处理对心脏和心肌缺血-再灌注损伤时发挥的作用。从而为临床治疗心肌-再灌注损伤提供了理论基础、实验依据和一种新的药物治疗。
方法:
1. 清洁级成年雄性SD大鼠,预处理组随机分为正常对照组(Control),缺血-再灌注损伤组(IR)和银杏内酯B预处理组(GB),离体心脏挂在Langendorff装置,心脏稳定30min后:Control组离体心脏持续灌注130min;IR离体心脏缺血30min复灌120min;GB组进行银杏内酯B预处理10min后再缺血30min复灌120min。后处理组心脏稳定30min后:Control组心脏再持续灌注90min;IR组心脏进行缺血30min复灌90min;GB组缺血30min,复灌前10min用银杏内酯B处理,再灌流80min。同时检测大鼠离体心功能的变化。预处理各组复灌5min时和后处理复灌15min时,留取冠脉流出液待测LDH含量。冷冻心脏,测量各组心脏的心肌梗死面积。
2. 进一步酶解法分离正常雄性SD大鼠心脏,得单个心室肌细胞,并进行培养。预处理组:Control组正常孵育11h;IR组培养6h后,行缺氧3h复氧2h模拟缺血-再灌注损伤;GB组加入不同浓度的银杏内酯B进行预处理6h,行缺氧3h复氧2h模拟缺血-再灌注损伤。后处理组:Control组正常孵育7h;IR组孵育2h后,行缺氧3h复氧2h模拟缺血-再灌注损伤;GB组先孵育2h后,行缺氧3h,再复氧2h时加入不同浓度的银杏内酯B进行后处理。最后测定这些细胞异丙肾上腺素刺激(isoproterenol,ISO)状态下收缩幅度,收缩时间和舒张90%的时间,收集各组心肌细胞,Western blot检查bcl-2和bax蛋白表达变化。
结果:
1、预处理结果:与正常组相比较,缺血-再灌注能够明显地降低离体心功能的各种参数,增加冠脉流出液中LDH 的释放量,加重了心肌梗死。而GB可减轻心肌损伤,改善大鼠心功能,减少LDH的释放,降低心肌梗死面积。而在细胞水平上,模拟缺血-再灌注损伤显著降低了心肌细胞ISO刺激收缩幅度,延长了收缩时间,缩短了舒张时间,并降低了bcl-2的表达,增加了bax的表达,使得bax/bcl-2的值增加。而用不同浓度的GB预处理以后能够不同程度地抑制细胞收缩幅度的降低,缩短收缩时间,延长舒张时间,降低了bax/bcl-2的值。
2、后处理结果:银杏内酯B后处理也能减轻心肌损伤,改善大鼠心功能,减少LDH的释放,降低心肌梗死面积,但没有预处理效果好。而在细胞水平上,不同浓度的银杏内酯B后处理也能够抑制心肌细胞的收缩幅度的降低,缩短收缩时间,延长舒张时间。
结论:
1、银杏内酯B预处理能够改善离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤,具有保护作用。
2、银杏内酯B后处理能够减轻离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤,也具有一定的保护作用,但效果没有预处理的好。