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干扰素调节因子(Interferon regulator factor,IRF)是一类重要的转录因子,能与IFNs基因启动子及干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)中特异的DNA片段(ISRE;IFN刺激反应元件)相结合,调节靶基因的表达。IRF在先天性免疫和适应性免疫调控、抗病毒感染、细胞增殖、凋亡等方面发挥重要的生物学效应。斑马鱼(Danio rerio)中IRF4有三个同源基因,即IRF4a,IRF4b和IRF4like基因,斑马鱼中IRF5基因只有一个。它们的功能研究在鱼类中尚未报道。本研究以斑马鱼为研究对象,探究了斑马鱼IRF4a,IRF4b和IRF5对I型干扰素的活化作用,并对IRF5的抗病毒功能和在下游信号通路中的调控作用进行了深入研究。本研究构建了斑马鱼IRF4a,IRF4b和IRF5的真核表达质粒:FLAG-IRF4a,FLAG-IRF4b,FLAG-IRF5。用草鱼呼肠孤病毒(GCRV)和鲤春病毒血症病毒(SVCV)分别感染斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4),发现GCRV能够诱导上调表达IRF4a,IRF4b和IRF5基因,且在感染12 h后上调倍数最高,与对照组相比,IRF4a的表达水平上调了13.8倍,IRF4b的表达水平上调了3.4倍,IRF5的表达水平上调了3.3倍。SVCV病毒也能诱导上调表达IRF4a,IRF4b和IRF5基因,并在感染24 h后上调倍数最高,与对照组相比,IRF4a的表达水平上调了41.0倍,IRF4b的表达水平上调了3.2倍,IRF5的表达水平上调了3.1倍。随后我们研究了斑马鱼IRF4a和IRF4b基因对I型干扰素启动子的活化作用。双荧光素酶分析发现斑马鱼IRF4a有显著诱导IFNΦ1和IFNΦ3启动子活性的作用。与对照组相比,IFNΦ1启动子能被激活5.0倍,IFNΦ3启动子能被激活2.3倍。斑马鱼IRF4b对IFNΦ1启动子也有显著的活化作用,但对IFNΦ3启动子没有显著的活化作用。与对照组相比,IFNΦ1启动子能被激活2.4倍。在EPC细胞中过表达斑马鱼IRF5基因,发现EPC中的Mx,IFN,Viperin和IRF7等抗病毒基因的表达水平显著上调。与对照组相比,Mx的表达水平上调了11.7倍,IFN的表达水平上调了5.7倍,Viperin的表达水平上调了54.1倍,IRF7的表达水平上调了8.1倍。随后,我们突变了斑马鱼IRF5基因,构建了FLAG-IRF5,FLAG-IRF5-△DBD和FLAG-IRF5-△IAD质粒,研究了斑马鱼IRF5,IRF5-△DBD和IRF5-△IAD基因对I型干扰素启动子的活化作用。双荧光素酶分析发现斑马鱼IRF5和IRF5-△IAD可显著诱导IFNΦ1启动子活化的作用,IRF5对IFNΦ1启动子的诱导活性为对照组的4.4倍,IRF5-△IAD对IFNΦ1启动子的诱导活性为对照组的3.1倍,其诱导强度没有IRF5高,而IRF5-△DBD对IFNΦ1启动子无诱导活性。但IFNΦ3启动子活性在转染FLAG-IRF5和FLAG-IRF5-△IAD表达质粒后受到明显的抑制作用,而IRF5-△DBD对IFNΦ3启动子无诱导活性,IRF5抑制IFNΦ3启动子活化为对照组的2.5倍,IRF5-△IAD抑制IFNΦ3启动子的活性为对照组的2.3倍,其抑制作用强度没有IRF5高。另外,抗病毒试验发现IRF5具有抗病毒的功能,在EPC中过表达IRF5有显著保护细胞免受GCRV病毒侵袭的作用,过表达IRF5可显著抑制GCRV病毒的复制,过表达IRF5细胞中的病毒含量比只感染GCRV病毒中的病毒含量低。