苦竹的分类研究及黄酮类物质的提取检测

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本文采用RAPD分子标记技术对苦竹及近缘竹种(大明竹、川竹、宜兴苦竹、硬头苦竹、高舌苦竹、衢县苦竹、垂枝苦竹、长叶苦竹、斑苦竹、秋竹、短穗竹、大黄苦竹、小黄苦竹、肿节竹、黄条金刚竹、烂头苦竹、螺节竹)进行了分子生物学分类研究。首先通过三种不同方法(CTAB法、SDS法、高盐-低PH值法)对苦竹及近缘竹种DNA提取的比较,表明:CTAB法提取的DNA纯度较好,提取的DNA均可以扩增出谱带,且谱带清晰,重现性好,完全可以满足RAPD分析的要求。其次优化了扩增反应体系,确定了扩增条件,筛选出20个最佳引物,共计扩增304个片段,扩增条带最多的引物是S431(20个片段),最少的是引物S571(6个片段),20个引物平均每个引物产生15.2个RAPD片段,片段长度多数集中300-2500bp之间。最后通过聚类分析软件分析,结果表明:大黄苦竹、小黄苦竹(少穗竹属)与其它15个竹种分为两大类;从日本引进的大明竹、黄条金刚竹与苦竹属聚类在一起,说明中、日产的苦竹没有分成两类;首次报道了黄条金刚竹在分子水平分类地位归属于苦竹属,并证明了RAPD分子标记可以对竹类植物种下等级进行分类。 苦竹是一种优良的经济竹种,它含有大量的黄酮类化合物和生物活性多糖及其它有效成分,是一个可以开发的新型药用资源。本文对竹叶中总黄酮的提取工艺进行了研究,确定了乙醇超声提取法(750/0(v/v)乙醇,料液比(l:15)(w/v),超声提取三次,每次ZOmin)为最佳提取__「_艺;并采用比色法测定苦j勺一及近缘竹种的总黄酮含量,结果表明苦竹及近缘竹种均含有丰富的黄酮类物质,其中小黄苦竹含量最高13.54(Ing/g),短穗竹含量最低了.24(mg/g)。 本实验的结果从分子生物学角度对苦竹及近缘竹种进行了分类,测定出它们黄酮含量的差异,为苦竹种质资源的保护、品种鉴定和天然药物的开发利用提供理论依据。
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