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通过连续两年的盆栽和大田试验,研究了施用不同用量腐熟饼肥对烤烟发育过程中质体色素变化和品质形成的影响,建立实用的烤烟类胡萝卜素高效液相色谱分析方法,明确了烤烟发育过程中质体色素变化的基本规律,以及不同饼肥用量对烤烟品质形成的调控效应及其相关生理机制,并利用四川大田样品初步探讨了类胡萝卜素降解与特色香气风格烟叶形成关系。主要研究内容和结果如下: 1、建立了快速和环保的采用反相高效液相色谱测定烤烟叶片中类胡萝卜素的方法:烤烟叶片中类胡萝卜素用含0.1%丁基羟基甲苯(BHT)的90%丙酮水溶液萃取后,加入0.1g醋酸铅,4℃低温以10000r/min离心5min,去除溶液中的蛋白质。色谱柱为C18反相色谱柱(3.9mm i.d.×150mm,5μm)。流动相:A,甲醇-异丙醇(体积比为1∶1);B,超纯水。流速:0.5 ml/min。梯度洗脱:0~10min(70%A+30%B);10~17min(100%A):17~30min(90%A+10%B)。进样量:10μL。检测波长:450nm。该方法简化了测试前处理,标准回收率为91.77%~102.8%,相对标准偏差为3.457%-0.372%。 2、测定了杀青前后烤烟叶片中性香气物质的含量:杀青前后不同中性致香成分的含量不同,杀青后含量降低的中性致香成分有3-己烯1醇、苯甲醇、芳樟醇、壬醛、5甲基正糠醛、癸醛、茄酮、β-紫罗兰酮、巨豆三烯酮、十四醛、2-十四烯-1醇、新植二烯、邻苯二甲酸二丁酯,其中壬醛、5甲基正糠醛、癸醛、β-紫罗兰酮、巨豆三烯酮、2-十四烯-1醇、邻苯二甲酸二丁酯、十四醛等,这些物质均以痕量存在。杀青后含量升高的中性致香物质有糠醛、对二甲苯、苯乙醛、香叶基丙酮、巨豆三烯酮混合物、二氢猕猴桃内酯等。杀青前后变化较小的香气物质有邻二甲苯、β-二氢大马酮等。杀青改变了发育过程中烟叶香气物质含量,研究新鲜烟叶香气物质含量应采用鲜叶、鲜叶冻干等样品提取相关物质,或者针对某个产区建立相应变化方程、误差系数来矫正研究数据。 3、利用反相高效液相色谱法和分光光度计法初步对不同部位烤烟叶片发育过程中叶绿素、类胡萝卜素进行了测定。结果表明,烤烟发育过程中叶绿素类色素前期变化较大,后期变化趋缓;中部叶片的β胡萝卜素、新黄质、紫黄质、叶黄质、叶黄素含量变化均较平稳;与下部叶片、中部叶片相比,上部叶片发育后期质体色素含量均较高,其中发育末期上部样品总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b分别为41.5 me g·Fw、33.4 mg/g·Fw和18.1 mg/g·Fw,β胡萝卜素、新黄质、紫黄质、叶黄质、叶黄素、总类胡萝卜素分别为16.1 mg/g·Fw、1.8mg/g·Fw、0.65mg/g·Fw、6.12mg/g·Fw、8.6 mg/g·Fw和24.69 mg/g·Fw;同期下部叶片总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b分别仅为4.3 mg/g·Fw、3.04mg/g·Fw和1.26 mg/g·Fw,β胡萝卜素、新黄质、紫黄质、叶黄质、叶黄素、总类胡萝卜素分别仅为上部叶片含量的25%、50%、50%、50%、70%和32%左右。