论文部分内容阅读
目的:胆固醇是细胞膜的主要组成部分,在破骨细胞的形成及生存中发挥重要作用。破骨细胞本身几乎不合成胆固醇,因此细胞内胆固醇容易失衡而影响破骨细胞形成或生存。研究发现HDL水平升高可促进破骨细胞胆固醇流出并促进其凋亡,但其促进胆固醇流出的机制及对破骨细胞形成的影响尚不清楚。本研究选取RAW264.7单核/巨噬细胞作为破骨前体细胞,以RANKL及M-CSF诱导其形成的破骨细胞为研究对象,探讨HDL促进破骨细胞胆固醇流出的机制及对其形成和生存的影响。方法:用含HDL的培养基培养RAW264.7细胞,加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨细胞,在不同的时间观察TRAP阳性的多核细胞的数目、大小和核固缩情况;用含不同浓度的HDL的培养基培养RAW264.7细胞,加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨细胞,液体闪烁计数仪检测其胆固醇流出情况;用含HDL的培养基培养RAW264.7细胞不同时间,加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨细胞,液体闪烁计数仪检测其胆固醇流出情况。HDL3、HDL2、Aop A1处理破骨细胞,观察其胆固醇流出情况及TRAP阳性的多核细胞的数目、大小和核固缩情况。用含HDL的培养基培养RAW264.7细胞3天,加入RANKL及M-CSF刺激其分化形成破骨细胞,荧光定量PCR检测破骨细胞ABCG1、SR-B1 m RNA的表达,Western blot检测ABCG1、SR-B1、Cav1蛋白表达。si RNA沉默ABCG1表达,观察其胆固醇流出情况及TRAP+的多核细胞的数目。结果:1)HDL处理细胞后,形成的破骨细胞最大直径减小,融合指数减小,核固缩的破骨细胞增多;2)HDL促进破骨细胞胆固醇流出,且呈浓度及时间依赖性,细胞内游离胆固醇明显减少;3)不同的HDL亚型促进破骨细胞胆固醇流出的能力不同,以HDL3能力最强;4)HDL处理使破骨细胞表达ABCG1增多而SR-B1减少;5)ABCG1 si RNA处理使HDL促进破骨细胞胆固醇流出的能力下降,破骨细胞形成恢复,凋亡减少;6)HDL处理使破骨细胞磷脂流出增多,Cav1表达减少。结论:HDL通过上调ABCG1的表达促进破骨细胞胆固醇流出,破坏破骨细胞内胆固醇平衡从而影响破骨细胞形成并促进其凋亡。