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克罗恩病（Crohn’s disease,CD）是一种慢性复发性肠道炎症,病因尚不明确。目前认为遗传易感性、肠道菌群以及免疫系统异常与CD的发生机制相关。淋巴管异常是CD常见的病理表现,也是CD粘膜水肿及肠道炎症的重要机制,研究发现淋巴管密度降低可能与CD患者术后复发相关,动物实验通过促进淋巴管增生能够改善小鼠的肠道炎症,提示促进淋巴管功能可能是CD治疗的一个新方向。CD的肠系膜脂肪组织肥厚是CD特有的组织病理学特征,除了作为外科手术中病变肠管的判断标志,肠系膜脂肪组织内脂肪细胞的形态功能异常可能参与了CD的发生发展。脂肪因子是由脂肪细胞分泌的一类因子,参与到代谢、免疫等机体调控中。研究发现Adiponectin、Leptin等脂肪因子在IBD表达异常并发挥着多种生物学效应。Apelin是一种新型的脂肪因子,已发现在心血管疾病、体液平衡、血糖吸收等方面发挥着重要作用,但在CD肠系膜组织中的表达情况如何还未有研究。新的研究发现Apelin对淋巴管的生成及功能均有一定影响,Apelin能够促进斑马鱼胸导管的发育、增加淋巴内皮细胞的数量,同时体外实验表明Apelin能够促进淋巴内皮细胞的增殖和迁移,同时体内实验也表明Apelin对稳定淋巴管功能也具有积极影响,但在CD状态下,Apelin是否会对CD淋巴管具有潜在的影响也是一个值得探究的话题。本课题首次探究了新型脂肪因子Apelin在CD血清及肠系膜脂肪组织中的表达情况,在此基础上采用CD动物模型Il-10-/-小鼠,探究Apelin对Il-10-/-小鼠肠道炎症的影响,并围绕肠淋巴管的改变探讨Apelin对Il-10-/-小鼠的具体作用机制,以期为CD的治疗提供新思路。全文共分三部分研究:第一部分克罗恩病患者血清及肠系膜脂肪组织中Apelin的表达情况目的:明确CD患者血清及肠系膜脂肪组织中Apelin的表达及相关因素。方法:纳入101例CD患者及67例门诊体检患者,采用ELISA的方法检测两组血清中Apelin的表达,同时分析CD组内Apelin浓度相关的临床资料。纳入24例CD患者及12例非CD患者,采用免疫组化对比两组患者肠系膜脂肪组织内Apelin的表达量,同时比较其中10例CD患者正常脂肪组织及病变脂肪组织内Apelin表达量,并选择Il-10-/-小鼠及野生型小鼠,比较两组小鼠肠系膜脂肪组织内Apelin的表达量。结果:CD组血清Apelin浓度显著高于Control组（621.2ng/ml,IQR 391.1-1596.3ng/ml vs 239.2 ng/ml,IQR 127.4-320ng/ml）。CD 组内 Apelin 高表达与内脏脂肪指数相关（R2=0.71,p<0.05）。活动期CD患者Apelin浓度高于缓解期患者（882.5ng/ml,IQR 221.8-1186ng/ml vs 442.7ng/ml,IQR 201.7-481.7ng/ml,p<0.05）,CRP≥10mg/L 的 CD 患者 Apelin 浓度高于 CRP<10mg/L 患者（1147ng/ml,IQR 245.4-2083ng/ml vs 657.7ng/ml,IQR 178.7-486.8ng/ml,p<0.05）。CD 组肠系膜脂肪组织内Apelin表达量显著高于Control组（相对IOD值:9.04±3.19versus 1.00±0.51,p<0.05）,并且htMAT组Apelin表达量显著高于nMAT组（相对IOD值:1.9±0.23 versus 1.00±0.22,p<0.05）。Il-10-/-小鼠肠系膜脂肪组织内Apelin也是显著高于野生型小鼠的（相对 IOD 值:0.31±0.05 versus 0.20±0.02,p<0.05）。结论:CD患者血清Apelin浓度高于正常人,Apelin高表达与内脏脂肪及疾病活动相关。CD患者及CD模型小鼠的肠系膜脂肪组织内Apelin表达较对照组均是升高的。第二部分克罗恩病肠淋巴管密度检测及形态学观察目的:比较CD患者及非CD患者肠淋巴管密度并观察淋巴管形态结构。方法:纳入24例CD患者作为CD组,另纳入12例非CD患者作为Control组。通过免疫组化方法分析对比两组患者肠粘膜中的淋巴管密度,并结合HE染色观察淋巴管形态。结果:CD组的肠淋巴管密度显著高于Control组（12.07%;IQR,10.45-13.73%versus 5.41%,IQR,4.30-6.65%,p<0.05）,同时CD组淋巴管出现淋巴管扩张、淋巴管阻塞、淋巴管周围炎、肉芽肿等异常表现。结论:CD患者肠淋巴管密度增高,并存在淋巴管阻塞、淋巴管周围炎等异常情况第三部分Apelin对Il-10-/-小鼠肠道的影响及基于淋巴管探讨Apelin对Il-10-/-的具体作用机制目的:明确Apelin对Il-10-/-肠道炎症的影响以及对肠淋巴管的影响及其作用机制。方法:选取15周龄的野生型小鼠作为WT组,选取15周龄的Il-10-/-小鼠随机分为Control组和Apelin组,Apelin组每天予以腹腔注射0.1umpl/kg的Apelin-13,WT组及Control予以等剂量的生理盐水,每周记录体重并评估各组小鼠疾病活动指数（DAI）,给药4周后处死。采用HE染色、qPCR技术比较三组小鼠肠道炎症及炎症因子的表达。采用免疫组化分析及Western-blot技术比较三组小鼠肠淋巴管密度。采用Evans blue染剂及肠系膜淋巴管显影技术评价各组小鼠肠淋巴管引流功能。最后采用Western blot技术分析Apelin相关的信号通路的表达。结果:与Control相比,Apelin组小鼠疾病活动指数降低（p<0.05）,肠粘膜炎症缓解,病理评分降低,Tnf-α、Il-β、Il-6的mRNA表达下降（p<0.05）。Apelin组小鼠淋巴管密度增加,肠系膜淋巴管引流功能增强。Apelin组小鼠肠组织内Akt、Erk1/2蛋白的磷酸化水平增加（p<0.05）。三组小鼠VEGFR3表达无差异（p>0.05）。与WT组相比,Control组与Apelin组的VEGF-C蛋白表达均增加,但Control组与Apelin组表达无区别（p>0.05）。结论:Apelin能够显著降低IL-10-/-小鼠肠道炎症,这种对炎症的改善作用可能通过Il-10-/-小鼠的肠淋巴管密度、促进肠淋巴管引流功能来实现的。Apelin对淋巴管的作用与Akt/Erk信号通路的激活有关,而不依赖于VEGF-C/VEGFR3信号通路。