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舌癌是口腔中最常见的恶性肿瘤,发病率高,占口腔癌的40%以上,居首位,而且区域淋巴结转移率高。目前治疗仍以手术治疗、放射治疗和化学治疗为主,晚期疗效差。有必要探索新的治疗方法。基因治疗是肿瘤治疗的新途径。研究表明,疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统是最有发展前景的肿瘤基因治疗策略之一,目前还未见治疗舌癌的研究报道。舌癌位置表浅,直视性强,对其进行基因治疗具有天然优势。为了探讨HSV1-tk/GCV系统治疗舌癌的应用前景,本研究围绕HSV1-tk基因转染结合应用GCV对人舌癌细胞的体外及裸鼠体内作用,进行了以下几个方面的工作: 1.利用脂质体(LipofectAMINE)介导法将含有全长HSV1-tk cDNA的逆转录病毒真核表达载体G1Na-tk转染至人舌癌脑转移细胞Tbp-TL中,经G418筛选,获得了稳定转染HSV1-tk基因的细胞克隆;通过PCR及原位杂交检测,从DNA和mRNA水平证实HSV1-tk基因已经稳定整合入舌癌细胞的染色体中,而且转染细胞有HSV1-TK的表达。将稳定转染细胞命名为Tbp-TL/TK。 2.对GCV作用于Tbp-TL/TK的体外效应进行了一系列研究,结果显示,稳定转染HSV1-tk基因的细胞对GCV的敏感性比亲本细胞提高了1000倍以上,IC50(半数抑制剂量)为1.1μg/mL。10μg/mL的GCV作用5天并不影响未转染细胞的生长,但可将表达TK的转染细胞全部杀死;1μg/mL的GCV也能在9天内将转染细胞全部杀死,表现出明显的“自杀效应”。