论文部分内容阅读
目的拟采用超高效液相色谱-光电二极管阵列UPLC-PDA法检测白花蛇舌草化学成分的含量以及经胃入血的可吸收成分；并探讨血浆中可吸收成分对类风湿性关节炎大鼠模型的治疗作用。方法(1)采用UPLC-PDA法测定白花蛇舌草中成分的含量。绘制各成分的标准曲线,并对精密度、回收率、样本稳定性和重现性进行验证；(2)比较空白对照组血浆,阿魏酸、对香豆酸对照品与白花蛇舌草溶液灌胃SD大鼠血浆样本的紫外光谱图及色谱图,测定该两种成分是否被SD大鼠吸收入血。(3)分别用低中高剂量阿魏酸干预胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠,用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)测定血清中TNF-α和IL-1β的含量,筛选阿魏酸高中低三个剂量中最佳干预剂量。(4)以筛选出的阿魏酸剂量为干预措施,从CIA大鼠的一般情况、关节炎指数、足爪肿胀度、关节滑膜组织病理改变及关节X线摄片,以及血清IL-1β、TNF-α水平多个方面,进一步探讨阿魏酸治疗类风湿性关节炎的作用。结果(1)白花蛇舌草中阿魏酸、对香豆酸成分色谱峰获得分离,阿魏酸线性范围0.005-0.08mg/ml (R2=0.9994),平均加样回收率为100.40%,相对标准差(RSD)为1.26%；对香豆酸线性范围0.0028-0.045mg/ml (R2=0.9998),平均加样回收率为99.86%,相对标准差(RSD)为2.41%。测得白花蛇舌草生药中阿魏酸含量为233ng/mg,对香豆酸为529ng/mg。(2)在灌胃白花蛇舌草SD大鼠血浆中测得阿魏酸、对香豆酸两种成份；(3)低、中、高剂量的阿魏酸,均能不同程度地下调CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α水平,但以高剂量阿魏酸下调幅度最为明显差异有显著性。(4)以高剂量阿魏酸干预CIA大鼠,①一般情况观察：模型组大鼠精神委靡,饮食、活动减少,后期可见毛发枯燥等症状;阿魏酸治疗组,在治疗2周后上述情况改善,正常组大鼠则未出现上述表现。②体质量增长变化情况：模型组与治疗组较正常组大鼠体重增长缓慢；治疗3周后,治疗组大鼠体质量增长较模型组明显(P<0.05)。③关节炎指数评分：在实验的前4周,模型组、治疗组大鼠关节炎指数积分逐渐增加,在第21天左右达到高峰；在第35天、42天时,治疗组大鼠关节炎指数明显低于模型组(P<0.01)。④足爪肿胀度检测：模型组大鼠足爪厚度较正常组明显增加(P<0.01),并逐渐上升；治疗组大鼠足爪厚度,在治疗3周后与模型组比较明显减少(P<0.01)。⑤关节X线摄片观察：免疫后14天左右,模型组大鼠踝关节周围组织肿胀,随着病程延长,足趾关节出现明显骨侵蚀病灶、关节间隙狭窄及融合等表现。治疗4周后,治疗组大鼠关节周围组织肿胀程度减低,骨质破坏程度减弱。⑥HE染色病理学观察：模型组滑膜组织可见炎性细胞浸润、大量新生血管、滑膜增厚等病理特征；治疗组新生血管及炎症细胞浸润减少,滑膜轻度增厚。⑦血清IL-1β、TNF-α水平：在第28天、42天时,模型组、治疗组大鼠血清IL-1β、TNF-α水平较正常组明显升高(P<0.01),但治疗组大鼠血清IL-1β、TNF-α水平明显低于模型组(P<0.01)。结论①采用UPLC-PDA首次测得了阿魏酸是白花蛇舌草中可经胃吸收入血的成分,该成分可能为白花蛇舌草治疗类风湿关节炎的有效成分。②阿魏酸可以降低细胞炎症因子IL-1β、TNF-α的水平,缓解胶原诱导性关节炎大鼠的炎症反应及骨质侵蚀,提示阿魏酸对胶原诱导性性关节炎大鼠关节具有保护作用,白花蛇舌草有效成分可能是痹肿消汤治疗类风湿性关节炎疗效的物质基础之一。