酵母葡聚糖生产工艺及生物活性研究

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啤酒酵母营养丰富,其β-(1,3)-D-葡聚糖含量约为30%,是具有免疫调节、抗菌抗癌活性的多糖,利用啤酒酵母生产酵母葡聚糖,不但可以提高经济和社会效益,还可以降低其对环境的污染。本文以啤酒酵母为原料,通过水提、碱提、酶解法提取,利用微滤膜、超滤膜纯化最后经喷雾干燥得到天然水溶性酵母β-葡聚糖。主要研究结果如下:首先,利用啤酒酵母粉为原料,热水提取甘露聚糖。经单因素实验研究确定最佳提取条件为:水料比40:1、时间1.5h、温度100℃,提取2次,甘露聚糖得率为16.35%,含量为53.78%。其次,水提后的残渣用2.5mol/L的NaOH提取酵母葡聚糖。在70℃条件下,按30:1、10:1的料液比分别提取1次,每次提取1h,离心得沉淀,水洗沉淀得非水溶性酵母β-葡聚糖,得率为17.65%,含量73.11%。再次,碱提取的离心清液,用冰醋酸调pH,利用木瓜蛋白酶酶解去除部分蛋白质。最佳酶解条件为:蛋白酶添加量为总体积的2.5‰,pH值7.0,温度50-55℃,酶解时间8h,酶解液经微滤、超滤分离浓缩,喷雾干燥得水溶性酵母β-葡聚糖粗品,得率为8.72%,含量72.02%。根据单因素实验结果,设计8因素4水平正交实验,得到最佳提取条件:热水料液比1:40;热水提取时间1.5h;热碱浓度2.5mol/L;热碱提取时间0.5h;热碱温度65℃;酶浓度2.5‰,酶解时间8h;酶解温度55℃。水溶性酵母β-葡聚糖的纯化精制。将粗品复溶、膜滤,经大孔吸附树脂柱进一步脱色脱蛋白,冷冻干燥得水溶性酵母β-葡聚糖精品,得率为6.52%,含量为91.35%。精致后的酵母β-葡聚糖经薄层层析分析表明,其主要成分为葡萄糖,其红外吸收光谱谱图中,在889-cm处可见明显的吸收峰,凝胶色谱法测定其分子量为50-180Kda。建立了天然水溶性酵母β-葡聚糖提取分离纯化工艺,建立了葡聚糖的鉴别方法和HPLC含量测定方法,并通过中试车间验证。上述工艺过程经2000L提取罐放大,证明工艺参数可靠,工艺过程稳定,所得水溶性酵母β-葡聚糖产品符合企业标准要求。生物活性研究方面:抑菌圈法试验表明,水溶性酵母β-葡聚糖对细菌有很明显的抑制作用,对酵母菌和霉菌抑制作用不明显;对几种微生物的抑制作用大小依次为金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌>沙门氏菌>大肠杆菌。碳粒廓清试验表明,水溶性酵母葡聚糖样品0.1g/Kg、0.4g/Kg、1.0g/Kg剂量灌胃给药,1.0g/Kg剂量组小鼠的巨噬细胞吞噬指数,与对照组相比具有显著差异(p<0.05)。三个剂量组小鼠的胸腺指数和脾脏指数,与对照组相比,均具有显著差异(p<0.05)。说明其具有增强细胞免疫力的作用。溶血素抗体生成试验表明,水溶性酵母葡聚糖样品0.1g/Kg、0.4g/Kg、1.0g/Kg剂量灌胃给药,三个剂量组小鼠血清的吸光度值,与对照组相比,均具有显著差异(p<0.05)。说明水溶性酵母葡聚糖具有增强体液免疫的的功能。遗传毒性试验结果表明,Ames试验阴性,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验阴性,小鼠精子畸形试验阴性。说明水溶性酵母葡聚糖样品使用安全,为实际无毒物质。
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