香茅草单萜合成酶基因的克隆、表达及蛋白纯化

来源 :东华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:khalista9
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物资源的综合应用是目前的研究热点,开发具有经济价值的植物源产品在现在市场上尤为迫切。大多数植物的次生代谢产物主要有萜类、生物碱、苯丙烷类等,植物次生代谢产物对植物本身和人类有着极其重要作用。对于植物,产生次生代谢产物是面对恶劣环境下保护自身的手段;而对于我们人类而言,很多植物次生代谢产物具有治疗疾病的重要功效,也是医药品和化妆品的重要来源。其中,萜类化合物是植物次生代谢产物中最多样化的天然代谢产物,具有重要的药理作用和广泛的生物学功能。因而,阐明萜类化合物在植物中的生物合成途径,研究其分子调控机制有着重要的意义。香茅(Cymbopogon citratus)具有栽培容易、易于管理、投资小、见效快等优点,易于发展大规模种植。其茎叶提取的精油在食物、防腐、医药等领域有着广泛的应用。有研究证实,香茅草精油中主要成分为萜类化合物,其药理作用主要包括抗菌、消炎、止痛、抗氧化、抑制肿瘤、抗焦虑、降低血糖及降压等。以往对香茅草的研究主要集中在其精油的提取和成分分析,对其重要化合物的生物合成及代谢调控的研究相对较少,基因组中大多数基因的功能仍不清楚,因此无法调控其特有的合成途径从而大幅度提高其产物的含量。本文首先从香茅草中克隆得到单萜合成酶基因,并进行生物信息学分析;然后通过构建原核表达体系,探究原核表达最佳条件;最后对目的蛋白进行诱导表达及纯化。本研究对阐明香茅草萜类代谢通路及其关键酶的功能具有重要意义,同时也为萜类的工业化发酵生产提供参考和优化靶点。本文的主要研究结果如下:1)首次克隆获得香茅草单萜合酶cDNA序列,通过一系列生物信息学分析,其开放阅读框全长1185bp,编码394个氨基酸。2)将目的基因插入pGEX及pET28a(+)原核表达载体中构建重组质粒,并研究了诱导时间、诱导温度、表达载体和表达菌株等对目的蛋白原核表达的影响,发现最佳诱导表达条件。在最佳诱导表达条件下,在大肠杆菌中进行诱导表达,并成功纯化出目的蛋白。综上所述,本研究成功地克隆了香茅草单萜合成酶基因,并在原核表达系统中进行了蛋白的诱导表达及纯化。为其它单萜类合成酶基因的研究奠定了基础,为单萜合酶系统发育和功能进化的研究提供了研究依据,进而有望利用更高效的基因工程技术来提高萜类化合物的产量。
其他文献
<正> 医疗机构是电气设计的特殊场所,这体现在以下三个方面:一是许多重要医疗场所不能停电,否则将会危及病人的生命,为此须采取可靠的供电措施,特别是IT供电系统;二是由于医
会议
唐代的永泰公主墓出土了大量壁画文物,这些壁画文物对唐代女性服装文化的研究提供了史实支撑,适逢中国提出“文化自信”建设重要时期,中国传统服饰文化作为物质文明与精神文
欠发达地区住房金融风险主要表现在住房消费信贷风险、土地储备信贷风险和房地产开发信贷风险三方面,而要规避风险则必须采取严格执行制度、加强风险监测、实行市场准入、增
英语短语动词由于其语义广泛,结构复杂,种类繁多而成为中国高中英语学习中最具挑战性的内容之一。传统的短语动词教学会在不深入解释的情况下枚举短语动词的含义,因此中国学生无法掌握这些短语。这导致了频繁的误用,甚至是会避免使用短语动词。与短语动词的句法和语义研究所不同的是,本研究非常重视短语动词在认知研究中的概念隐喻理论。此前许多研究人员已经探索了认知理论对短语动词教学的潜在影响,并取得了许多令人鼓舞的结
随着农业结构调整的深入,制约结构调整的矛盾也越来越突出,农村资金需求规模和结构已呈现出一系列新的变化,对农村金融服务提出了更高的要求.本文从五个方面提出了金融支持农
月壤作为月球表面随处可取的资源,其就地开发及有效利用对于减少月球开发过程中对地球资源的依赖和消耗具有重要意义。月壤的利用离不开对其成型技术的开发与研究,激光3D 打印是一种通过层层堆积的方式将数字化模型直接制造出实体零器件、艺术品等的先进工业技术,可实现高熔点材料的任意形状制造,因此可能成为未来月壤成型的有效手段之一。然而,地球上的真实月壤存量极少,难以满足科学研究及工程应用的大量需求,因此各种模
近距煤层开采时,若下煤层工作面回采巷道布置不合理,可能导致上煤层煤柱的瞬时失稳,造成动力冲击事故的发生。以平朔安家岭井工二矿近距离煤层开采为工程背景,建立近距煤层开