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研究背景淋巴瘤(Lymphoma)起源于淋巴结和淋巴组织,是一种由于淋巴细胞增殖分化发生恶变导致的恶性血液系统肿瘤,根据组织病理学改变,又可分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma,HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL),后者占所有淋巴瘤的比例高达90%左右,根据其来源又可分为B细胞型及T/NK细胞型,其中弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是最常见的NHL亚型,约占35%～40%,其分子类型及临床表现具有高度异质性。CHOP方案是治疗DLBCL的标准方案,随着利妥昔单抗(Rituximab)的引入,R-CHOP成为治疗该类型淋巴瘤的一线方案,R-CHOP方案使得患者的总体应答率及总生存时间得以显著提高,但仍然有30%左右的患者在治疗过程中出现耐药或完成6-8周期治疗后出现早期复发,而这部分患者预后极差。因此,寻找更多有效治疗靶点及新治疗方案,或是提高现有治疗方案的效率具有重要临床意义。姜黄素(curcumin,cur)是一种植物多酚,提取于姜科植物姜黄,因具备多种药理作用的同时毒副作用小、相对安全而成为研究的热点。抗癌是姜黄素的主要作用之一,目前研究发现姜黄素可在多种恶性肿瘤中发挥抗癌作用,如结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌和宫颈癌等,且相关临床试验也一直在进行中,但姜黄素在弥漫大B细胞淋巴瘤中是否存在抗淋巴瘤效应及其具体作用机制尚不明确。目的探讨姜黄素治疗人弥漫大B细胞淋巴瘤的可能性,阐述姜黄素抑制DLBCL增殖、促进细胞凋亡及阻滞细胞周期的作用机制。方法1、体外培养人弥漫大B细胞淋巴瘤Ly1和Ly3细胞,用不同浓度姜黄素处理细胞不同时间后CCK-8法测细胞活力。2、选择姜黄素浓度5μM、10μM作用Ly1和Ly3细胞24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期情况。3、Western blot检测10μM姜黄素作用Ly1、Ly3细胞不同时间(0,2,4,8,12h)后PPARγ及Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR和凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3的变化。4、Western blot检测PPARγ拮抗剂GW9662(10μM)或激动剂Rosiglitazone(20μM)作用细胞24h后PPARγ及Akt信号通路相关蛋白变化。5、在Ly1细胞中,10μM姜黄素联合PPARγ拮抗剂GW9662(10μM)或激动剂Rosiglitazone(20μM)作用后重复上述相关实验。6、Ly1细胞皮下注射到NOD/SCID小鼠建立淋巴瘤模型,建模成功后以姜黄素注射小鼠,观察小鼠情况及移植瘤大小,待实验终点解剖小鼠移植瘤,进行免疫组化检测PPARγ表达情况。结果1、CCK-8检测结果显示:姜黄素在0-40μM浓度范围内呈浓度时间依赖性抑制Ly1和Ly3细胞增殖。2、流式细胞仪检测结果显示:与对照组(0μmol/L姜黄素)比较,5、10μmol/L姜黄素能促进细胞凋亡、阻滞细胞于G2期;与5μmol/L姜黄素处理组比较,10μmol/L姜黄素作用明显增强(P<0.05)。3、Western blot结果显示:10μmol/L姜黄素作用后,随着作用时间增加,PPARγ、Cleaved Caspase3蛋白水平升高,p-Akt、p-mTOR蛋白水平降低,单独用PPARγ激动剂Rosiglitazone(20μmol/L)处理24 h后蛋白变化与之相同,而单独用PPARγ拮抗剂GW9662(10μmol/L)处理后则相反,表现为PPARγ、Cleaved Caspase3蛋白水平降低,p-Akt、p-mTOR蛋白水平升高。4、与姜黄素单独作用比较,在姜黄素作用的基础上联合使用PPARγ拮抗剂使上述结果部分回复,激动剂则进一步增强了上述结果。5、成功构建Ly1细胞移植的NOD/SCID淋巴瘤小鼠模型,姜黄素能抑制移植瘤生长,且姜黄素注射组肿瘤中PPARγ表达较高。结论1、姜黄素对弥漫大B细胞淋巴瘤有抑制增殖、促进凋亡及阻滞细胞周期作用。2、姜黄素对弥漫大B细胞淋巴瘤的抑制作用是通过上调PPARγ的表达,从而进一步抑制Akt信号通路而实现的。