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结核分枝杆菌(M．tuberculosis)是引起结核病的病原体。由于耐多药菌株的出现和HIV的协同作用，使得一度被控制的结核病的发病率在全球范围内显著回升，因此，寻找新一代抗结核药物已迫在眉睫。细胞壁是分枝杆菌赖以生存的结构基础，其核心结构由分枝菌酸、聚阿拉伯糖半乳糖及肽聚糖三种组分组成。分枝菌酸和聚阿拉伯糖半乳糖通过衔接双糖(L-鼠李糖-D-N-乙酰葡糖胺)共价连接到肽聚糖大分子上，衔接双糖尤其是鼠李糖可作为研发新一代抗结核药物的理想靶标。衔接双糖中鼠李糖的糖基供体是dTDP-鼠李糖，四种酶(Rm1A-D)参与了由底物葡萄糖-1-磷酸合成dTDP-鼠李糖的过程，编码这四种酶的rm1A-D基因存在于结核分枝杆菌基因组中不同的位置，其中rm1B和rm1C同属于一个操纵子。尽管我们已发现在结核分枝杆菌中不存在dTDP-鼠李糖生物合成的补救代谢途径，但仍有必要从理论上证明编码结核分枝杆菌dTDP-鼠李糖合成酶系的rm1A-D基因为结核分枝杆菌的生长相关基因。 本论文的目的是用基因剔除方法证明结核分枝杆菌中编码Rm1B(dTDP-D-葡萄糖-4，6-脱氢酶)和Rm1C(dTDP-4-酮基-6-脱氧-D-葡萄糖3，5表异构酶)的rm1B和C基因是分枝杆菌生长过程中所必需的基因，这将为dTDP-鼠李糖作为研发抗结核新药的理想靶标提供更有力的证据。 利用与结核分枝杆菌有相同细胞壁结构，但生长快速且无致病性的耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis，Sm)mc~2155菌株作为实验模型。用携带Sm rm1B：：Kan~R突变基因的条件复制性质粒转化mc~2155菌株，在42℃条件下筛选出mc~2155突变菌株M1(其基因组中同时存在Sm rm1B和Sm rm1B：：Kan~R)。用携带结核分枝杆菌M．tuberculosis，Tb)rm1B和rm1C基因的营救质粒转化mc~2155 M1突变菌株，Tb rm1B和Tb rm1C基因的表达产物可补偿mc~2155 M1突变菌株中突变的Sm rm1B以及突变的Sm rm1C基因的功能，在30℃条件下筛选出mc~2155 M2突变菌株(其基因组中只存在Sm rm1B：：Kan~R，即Sm rm1B基因剔除；同时Sm rm1B：：Kan~R下游的Sm rm1C基因发生框移突变)。分别在30℃和42℃条件下测定