副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus, Vp)是一种嗜盐菌,广泛分布于海洋环境及海产品中。该菌能引起人类的食物中毒及各种水生动物疾病。人类食物中毒的症状有腹泻、恶心、呕吐、发热,甚至脱水、昏迷等症状。耐热直接溶血素(TDH),耐热直接溶血素相关溶血素(TRH)是公认的副溶血弧菌主要毒力因子,它们与副溶血弧菌的致病能力密切相关。近年来尿素酶和三型分泌系统的致病力也逐渐受到学者的重视。在水产养殖中,副溶血弧菌引起的疾病有牡蛎肠炎,虾红腿病,蟹大规模死亡,大黄鱼弧菌病等。目前养殖业普遍使用抗生素治疗水生动物弧菌病,过量和滥用药物已严重威胁到我国对外贸易,养殖业和人类健康。本研究研究目的是：(1)对携带tdh, ureC和T3SS2毒力基因的副溶血弧菌环境株和临床株进行分子分型,为建立一个可靠的食品污染溯源体系、深入研究副溶血弧菌分子多样性提供基础；(2)建立能快速检测副溶血弧菌主要耐药基因的PCR方法。为建立副溶血弧菌分子分型与溯源体系,利用多位点序列分型技术(MLST)对实验室2003-2009年分离或保存的71株副溶血弧菌临床株、环境株和海产品株进行分子分型。结果表明,7个看家基因分辨率高,均能达到良好的分型效果。71株细菌被归为62个STs,这62个STs与网络数据库已有的共计201个STs被分为4个克隆群(Clonal Complexes, CC),18个组(Groups)和141个单型(Singletons)。其中本实验室54个STs为单型,占总单型的38.3%,其余8个STs分布在2个克隆群和6个组中。进化树结果与eBURST结果基本一致,两者均证明了副溶血弧菌的分子多态性。eBURST软件的分析为追踪流行菌株及预测克隆群始祖提供了有力工具。副溶血弧菌CC3群是国际上自1996以来的主要流行菌群,被认为是始祖菌。我国2006-2009年的部分临床分离株也属于CC3。在流行性克隆群中,包含了众多血清型,提示了传统血清型分型方式的局限性。进化树分析对不同STs之间的关系提供了更多细节,在114个STs中的所有菌株形成4个分枝,其中本实验室的大部分菌株和国内外的部分代表性菌株在其中的两个主要分枝,但有5个STs(分别代表4个菌株)则在另两个分枝。然而,我们也发现使用这一MLST分型方法作为食源性疾病发生时的溯源有其局限性,需要适当考虑毒力基因的序列分析。根据相关资料,磺胺类、氨基糖苷类、四环素类及头孢类基因为副溶血弧菌携带的主要耐药基因。为建立一种检测副溶血弧菌主要耐药基因的快速方法,先通过单一PCR确定阳性菌株与引物对,后优化PCR体系条件,建立了两个双重PCR体系,分别同时检测磺胺类和氨基糖苷类,四环素类和头孢类耐药基因。特异性试验表明不耐药菌株中检测不出耐药基因,敏感性试验表明只要阳性细菌模板浓度达到105CFU/mL以上,即可出现阳性结果。应用该体系对宁波地区88株细菌进行耐药基因的检测,结果头孢类耐药基因bla TEM的携带率为91.7%,四环素类耐药基因tetB的检测率为0,磺胺类sul2和氨基糖苷类strB的检测率分别为16.7%和43.3%。以上结果证明该体系快速有效,可应用在海产品中耐药副溶血弧菌的检出,为进出口贸易提供技术支持。