纤维素酶三联工艺制备猕猴桃果胶及对肠细胞β-arrestin和AchM2受体的作用

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食用猕猴桃可以促进胃肠蠕动,改善消化道功能。据研究猕猴桃果皮、果渣中含有丰富的膳食纤维;尤其是可溶性膳食纤维-果胶(SDF-P),它是由半乳糖醛酸(D-GA)缩合而成。SDF-P在消化道内具有很强的吸附水分能力,可增加肠道内容物体积,促进肠道蠕动,从而有可能改善中老年人胃肠机能,减少或预防肠道疾患和肠癌的发生。研究还表明胃肠道粘膜和平滑肌细胞具有乙酰胆碱能M受体(Ach-M),当该受体激动时消化液分泌增加,并伴随肠蠕动增加。本研究以猕猴桃皮渣为对象,采用HCl水解为基础,结合纤维素酶(Cellulase)和微波处理,充分降解植物细胞壁大分子纤维素,建立高效制备SDF-P的三联工艺。将精制SDF-P配制成生理溶液,研究其对肠上皮细胞和平滑肌细胞Ach-M的作用机制,以求证猕猴桃SDF-P改善肠功能的细胞学作用。1高效制备猕猴桃精制SDF-P的工艺建立:对四因素进行剂量筛选以找到三个主要影响因素,即酶浓度/酸浓度、料液比和微波时间。皮渣纤维素先经HCl水解处理、切断大分子间的部分连接,进而加入适量纤维素酶和微波加温,形成三联工艺,有效控制酶解速率和分子量,大大提高SDF-P的得率和纯度。猕猴桃皮和渣中SDF-P得率分别在8.96%和6.67%,它们的纯度分别达到64.82%±0.1736%和52.84%±0.0572%;较单纯性HCl或酶解其得率提高2-11倍、纯度提高3-16倍;并且初步证实果皮中的果胶含量大于果渣。采用纤维素酶三联工艺明显减少加工环节,可有效提高生产率并直接用于工业化生产2用精制猕猴桃SDF-P配制细胞培养液,对小鼠原代小肠平滑肌细胞(ISM)Caco-2细胞和DLD-1细胞培养并研究其作用。发现10uM SDF-P引起ISM细胞B-arrestin骨架蛋白收缩、钙离子内流及胞内钙离子浓度升高,ISM细胞收缩增强;该浓度条件下,激光共聚焦和流氏细胞术均证实SDF-P引起Caco-2细胞和DLD-1细胞AchM2受体内吞并向核内聚集,表明SDF-P激动AchM2受体;Western Blot的研究进一步证实Caco-2细胞和ISM细胞裂解液中β-arrestin与Ach M2受体间出现协同定位变化,表明猕猴SDF-P可能具有乙酰胆碱(Ach)作用,经β-arrestin骨架蛋白介导,促进了细胞膜AchM2受体内吞,从而进一步引起肠肌的收缩,是增进肠蠕动的细胞学机理。本研究在细胞水平证实,猕猴桃SDF-P具有增进肠平滑肌细胞收缩或上皮细胞运动的功能,有可能作为一种新型的肠功能改善的食品补充剂。
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